Hotstart Taq DNA پولیمریز
Hot Start Taq DNA Polymerase (د انټي باډي تعدیل) د Thermus aquaticus YT-1 څخه د تودوخې تودوخې وړ DNA پولیمیریز دی، چې د 5′→ 3′ پولیمریز فعالیت او د 5´ فلیپ انډونیوکلیز فعالیت لري.د هاټ سټارټ Taq DNA پولیمیریز د Taq DNA پولیمیریز دی چې د ترمولابیل تاق انټي باډیز لخوا بدل شوی.د انټي باډي ترمیم د PCR ځانګړتیا، حساسیت او حاصلات زیات کړي.
اجزا
| اجزا | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq بفر | 4×1 ملی لیتر | 4 × 10 ملی لیتر | 4×50 ملی لیتر | 5 × 400 ملی لیتر |
| هاټ سټارټ ټیک DNA پولیمریز (د انټي باډي ترمیم شوی) (5 U/μL) | 0.1 ملی لیتر | 1 ملی لیتر | 5 ملی لیتر | 10×5 ملی لیتر |
غوښتنلیکونه
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 په 25℃)، 100 mm KCl، 0.1 mM EDTA، 1 mM dithiothreitol، 0.5% Tween20، 0.5% IGEPALCA-630 او 50% ګیلیسرول.
د ذخیره کولو حالت
تر 0°C لاندې ترانسپورت او په -25°C~-15°C کې زیرمه شي.
د واحد تعریف
یو واحد د انزایمونو مقدار په توګه تعریف شوی چې د 15 nmol dNTP په 30 دقیقو کې د 75 درجې سانتي ګراد په تیزاب کې ناحلونکي موادو کې شاملوي.
د کیفیت کنټرول
1.Endonuclease فعالیت:د 4 μg pUC19 DNA سره د 20 U انزایم په 37 ℃ کې د 4 ساعتونو لپاره انزیم کول د DNA د کشف وړ تخریب لامل نه شو لکه څنګه چې د جیل الیکٹروفورسیس لخوا ټاکل کیږي.
2.5 kb لامبدا PCR:د 200 µM dNTPs او 0.2 µM پریمرونو په شتون کې د 1.25 واحد تاق DNA پولیمیریز سره د 5 ng لامبډا DNA د PCR امپلیفیکیشن 25 سایکلونه د 5 kb محصول تمه کیږي.
3.Exonuclease فعالیت:د 50 µl عکس العمل انکیوبیشن چې لږترلږه 12.5 U Taq DNA Polymerase لري د 10 nmol 5´-FAM oligonucleotide سره د 30 دقیقو لپاره په 37℃ کې د کشف وړ تخریب نه رامینځته کوي.
4.د RNase فعالیت:د 10 µL تعامل چې 20 U انزایم لري د 1μg RNA لیږدونې سره د 2 ساعتونو لپاره په 37°C کې د RNA د کشف وړ تخریب لامل نه شو لکه څنګه چې د جیل الیکٹروفورسیس لخوا ټاکل کیږي.
5.د حرارت غیر فعالول:نه.
د غبرګون سیسټم
| اجزا | حجم |
| کينډۍ DNAa | اختیاري |
| 10 μM فارورډ پریمر | 0.5 μL |
| 10 μM ریورس پریمر | 0.5 μL |
| dNTP مکس (10mm هر یو) | 0.5 μL |
| 5×HC Taq بفر | 5 μL |
| تاک DNA پولیمریزب(5U/μL) | 0.125 μL |
| له نیوکلیز پاکې اوبه | تر 25 μL پورې |
یادونه:
1) یو.
| DNA | مقدار |
| جینومیک | 1 ng-1 μg |
| پلاسمیډ یا ویروس | 1 pg-1 ng |
2) ب.د Taq DNA Polymerase مطلوب غلظت ممکن د 5-50 واحدونو/mL (0.1-0.5 واحدونو/25 µL غبرګون) په ځانګړو غوښتنلیکونو کې وي.
د حرارتي سایکل چلولو پروتوکول
PCR
| ګام | دحرارت درجه((°C) | وخت | سایکلونه |
| ابتدايي تخریبa | 95 ℃ | 1-3 دقیقې | - |
| له منځه وړل | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 سایکلونه |
| annealingب | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| تمدید | 68 ℃ | 1kb/min | |
| وروستی تمدید | 68 ℃ | ۵ دقیقې | - |
یادونه:
1) د 95 درجې سانتي ګراد د 1 دقیقې ابتدايي تخریب د ډیری پراخوالي لپاره کافي دی.د سختو نمونو لپاره، د 95 درجې سانتي ګراد کې د 2-3 دقیقو اوږد کمولو سپارښتنه کیږي.د کالونی PCR سره، په 95 ° C کې د 5 دقیقو ابتدايي تخریب سپارښتنه کیږي.
2) د annealing مرحله عموما 15-60 s وي.د انیل کولو تودوخه د پریمر جوړه Tm پورې اړه لري او معمولا 45-68 ℃ وي.
