DNase I (Rnase Free) (5u/ul)
بلی نمبر: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) یو endodeoxyribonuclease دی چې کولی شي د واحد یا دوه اړخیز DNA هضم کړي.دا د فاسفوډیسټر بانډونه پیژني او ماتوي ترڅو monodeoxynucleotides یا واحد- یا دوه اړخیز oligodeoxynucleotides د فاسفیت ګروپونو سره په 5'-ترمینل کې او هایدروکسیل په 3'-ټرمینل کې تولید کړي.د DNase I فعالیت په Ca پورې اړه لري2+او د دوه اړخیزو فلزي ایونونو لکه Mn لخوا فعال کیدی شي2+او Zn2+.5 mM Ca2+انزایم د هایدرولیسس څخه ساتي.د Mg په شتون کې2+، انزایم کولی شي په تصادفي ډول د DNA په هره برخه کې هر سایټ پیژني او پاک کړي.د Mn په شتون کې2+د DNA دوه ډنډونه په ورته وخت کې پیژندل کیدی شي او تقریبا په ورته سایټ کې ټوټه ټوټه شي ترڅو د فلیټ پای DNA ټوټې یا د 1-2 نیوکلیوټایډونو په اوږدو کې د چپکي پای DNA ټوټې رامینځته کړي.
اجزا
| نوم | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I، RNase وړیا | 20μL | 200μL | 1 ملی لیتر | 10 ملی لیتر |
| 10×DNase I بفر | 1 ملی لیتر | 1 ملی لیتر | 5 × 1mL | 5 × 10 ملی لیتر |
د ذخیره کولو شرایط
-25℃~-15℃ د ذخیره کولو لپاره؛د یخ کڅوړو لاندې ټرانسپورټ.
لارښوونې
1. د عکس العمل محلول په RNase-free ټیوب کې د لاندې لیست شوي تناسب سره سم چمتو کړئ:
| اجزا | حجم |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I بفر | 1μL |
| DNase I، RNase وړیا (5U/μL) | 1 U په هر µg RNA① |
| ddH2O | تر 10μL پورې |
یادونه: ①د DNase I حجم محاسبه کړئ چې د RNA مقدار پراساس اضافه کولو ته اړتیا لري.
2. د 15 دقیقو لپاره 37 ℃؛
3. د 2.5mM ~ 5mM وروستي غلظت ته 0.5M EDTA اضافه کړئ، او د عکس العمل د مخنیوي لپاره د 10 دقیقو لپاره په 65℃ تودوخه کړئ.نمونه په مستقیم ډول د راتلونکي عکس العمل لپاره کارول کیدی شي لکه ریورس لیږدتجربه
د واحد تعریف
یو واحد د انزایم مقدار په توګه تعریف شوی کوم چې د pBR322 1µg په بشپړ ډول تخریب کوي.DNA په 10 دقیقو کې په 37 ℃ کې.
د کیفیت کنټرول
RNase:د DNase I 5U د 1.6µg MS2 RNA سره د 4 ساعتونو لپاره په 37℃ کې هیڅ تخریب نه ترلاسه کويد agarose gel electrophoresis لخوا ټاکل کیږي.
یادښتونه
1. مهرباني وکړئ 0.5MEDTA پخپله چمتو کړئ.
2. په هر µg RNA کې 1U DNase I وکاروئ.په هرصورت، که چیرې RNA له 1µg څخه کم وي، مهرباني وکړئ 1U DNase I وکاروئ.
3. مهرباني وکړئ د عملیاتو په جریان کې انزایم په یخ کې ځای په ځای کړئ.
