د تودوخې حساس UNG
د تودوخې حساس UNG (TS-UNG) په E. coli کې د بیا جوړونکي بیان لخوا ترلاسه کیږي.انزایم د یورایل لرونکي واحد او دوه اړخیز DNA څخه د وړیا uracil خوشې کول کټالیز کوي او د RNA پروړاندې غیر فعال دي.د E. coli جین اصل د دودیز UNG انزایم سره په پرتله، TS-UNG انزایم په ټیټ تودوخې (20 ℃ ~ 37 ℃) کې لوړ فعالیت لري او د تودوخې حساس دی او په اسانۍ سره غیر فعال (50 ℃) دی، د dUTP لرونکی امپلیفیکیشن له تخریب څخه مخنیوی کوي. محصولات د خونې په حرارت کې د پاتې فعالیت لخوا چې ممکن د دودیز UNG انزایم غیر فعال کیدو وروسته پاتې شي.نو ځکه، TS-UNG انزایم نه یوازې د PCR د ککړتیا مخنیوي غبرګون لپاره مناسب دی، بلکې د RT-PCR امپلیفیکیشن پروګرام سره هم ښه مطابقت لري او د RT-PCR د ککړتیا مخنیوي غبرګون کې کارول کیدی شي.
وړاندیز شوی غوښتنلیک
د ککړتیا مخنیوی پراخول
د ذخیره کولو حالت
-20 ° C د اوږدې مودې ذخیره کولو لپاره، باید د کارولو دمخه ښه مخلوط شي، د بار بار کنګل کیدو څخه مخنیوی وشي.
د ذخیره کولو بفر
20 mM Tris-HCl (pH 7.5)، 100 mM NaCl، 0.1 mM EDTA، 1 mM DTT، سټیبلائزر، 50٪ ګیلیسرول.
د واحد تعریف
د انزایم اندازه چې د 1µg واحد ډنډ شوي DNA تخریب کولو لپاره اړین دي چې په 37 درجې سانتي ګراد کې په 1 ساعت کې dU اډې لري د فعالیت 1 واحد دی (U).
د کیفیت کنټرول
1.د SDS-PAGE الکتروفوریټیک پاکوالی له 98٪ څخه ډیر
2.د تخریب فعالیت، د بیچ څخه تر بیچ کنټرول، ثبات
3.نه خارجي نیوکلیز فعالیت، نه خارجي انډونیوکلیز یا exonuclease ککړتیا.
لارښوونې
| اجزا | حجم (μL) | وروستی تمرکز |
| 10 × PCR بفر (dNTP وړیا، Mg²+وړیا) | 5 | ۱× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (د dTTP ځای په ځای کول) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × پریمر مکسa | 2 | ۱× |
| کينډۍ | - | ＜1μg/ عکس العمل |
| ddH₂O | تر 50 پورې | - |
یادونه: الف: که د qPCR/qRT-PCR لپاره کارول کیږي، د فلوروسینټ تحقیقات باید د غبرګون سیسټم کې اضافه شي.عموما، د 0.2 μM وروستی پریمر غلظت کولی شي ښه پایلې ورکړي؛کله چې د عکس العمل فعالیت ضعیف وي ، د پریمر غلظت د 0.2-1 μM په حد کې تنظیم کیدی شي.عموما، د تحقیقاتو غلظت د 0.1-0.3 μM په حد کې مطلوب دی.د غلظت تدریجي تجربې د پریمر او تحقیقاتو غوره ترکیب موندلو لپاره ترسره کیدی شي.
یادښتونه
1.د TS-UNG انزایم مطلوب عکس العمل تودوخه نسبتا ټیټه ده، او دا د 20 ℃ ~ 37 ℃ حد کې مطلوب کیدی شي، د انزایم ډوز او د غبرګون وخت د 0.1 ~ 0.5 U، 5 ~ په حد کې مطلوب کیدی شي. 10 دقیقېاو انزایم کولی شي د ریورس لیږد په پروسه کې غیر فعال شي.
2.دا د ککړتیا مخنیوي لپاره د PCR او RT-PCR لپاره مناسب دی.
3.د بار بار کنګل کیدو څخه ډډه وکړئ، او د تودوخې لوی بدلونونو سره مخ مه کوئ.
4.مختلف جینونه چې باید پراخ شي د dUTP مختلف کارولو موثریت او د UNG انزایمونو حساسیت لري ، نو له همدې امله ، که د UNG سیسټم کارول د کشف حساسیت کمیدو لامل شي ، د عکس العمل سیسټم باید تنظیم او اصلاح شي ، که تاسو تخنیکي ملاتړ ته اړتیا لرئ ، مهرباني وکړئ اړیکه ونیسئ زموږ شرکت
