2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
بلی نمبر: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) د DNA استخراج یا نمونې چمتو کولو پرته د نمونو څخه مستقیم PCR ترسره کولو لپاره ډیزاین شوی.دا ریجنټ د هاټ سټارټ DNA پولیمریز، uracil DNA glycosylase (UNG)، RNase Inhibitor، MgCl څخه جوړ دی.2, dNTPs (د dTTP پرځای dUTP سره)، او ثبات کونکي، د کمیتي PCR (qPCR) لپاره.دا ریجنټ د لوړ مخنیوی زغم وړاندې کوي، او په دې توګه دا په مستقیم ډول د نمونو موندلو لپاره کارول کیدی شي لکه د ستوني سویب، لعاب، د ټول وینې ضد، پلازما، او سیرم پرته د DNA استخراج.ریاجنټ د qPCR لپاره ملکیت بفر کاروي د انزیبیټري ضد DNA پولیمیریز او UNG انزایمونو مخلوط انزایمونو سره.له همدې امله، دا کولی شي په نمونو کې د هدف جینونو ښه پراخوالی ترلاسه کړي چې مخنیوی کونکي لري او د PCR د پاتې کیدو او ایروسول ککړتیا له امله رامینځته شوي غلط مثبت تحول مخه نیسي.دا ریجنټ د ډیری فلوروسینټ کمیتي PCR وسیلو سره مطابقت لري ، لکه اپلایډ بایو سیسټم ، ایپینډورف ، بایو راډ ، روچ او داسې نور.
اجزا
1. 50×Sensidirect Enzyme/UNG مکس
2. 2×SensiDirect Premix بفر (dUTP)
د ذخیره کولو شرایط
ټولې برخې باید د اوږدې مودې ذخیره کولو لپاره -20 ℃ او تر 3 میاشتو پورې 4 ℃ وساتل شي.مهرباني وکړئ د کارولو دمخه د غوړولو او سینټرفیوج وروسته په ښه توګه سره مخلوط کړئ.د پرله پسې کنګل کیدو څخه ډډه وکړئ.
د سایکل چلولو پروتوکول
| ګام | دحرارت درجه | وخت | سایکل |
| هضم | 50℃ | ۲ دقیقې | 1 |
| د پولیمیریز فعالول | 95℃ | 1-5 دقیقې | 1 |
| ډینچر | 95℃ | 10-20s | 40-50 |
| اینیلینګ/توسیع | 56-64℃ | 20-60s |
د پایپټینګ لارښوونې
| Reagent | په حجم کې غبرګون | د عکس العمل حجم | وروستی تمرکز |
| 2×SensiDirect Premix بفر (dUTP) | 12.5µL | 25µL | ۱× |
| 50×SensiDirect Enzyme/UNG مکس | 0.5µL | 1µL | ۱× |
| 25×Primer-Probe Mix۱، ۲ | 1µL | 2µL | ۱× |
| نمونه۳، ۴ | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| ټول حجم | 25 μL | 50 μL | - |
1. د پریمر وروستی غلظت معمولا 0.2μM دی.د غوره پایلو لپاره، د پریمر غلظت د 0.2-1μM په حد کې مطلوب کیدی شي.
2. عموما، د تحقیقاتو غلظت د 0.1-0.3μM په حد کې مطلوب کیدی شي.د تحقیقاتو غوره غلظت د ریښتیني وخت PCR امپلیفیکیشن وسیلې ، د تحقیقاتو ډول او د فلوروسینټ لیبل کولو مادې ډول پورې اړه لري.مهرباني وکړئ د وسیلې لارښود یا د هر فلوروسینټ تحقیقات ځانګړي اړتیاو ته مراجعه وکړئ.
3. د نمونو مختلف ډولونه مختلف ډولونه او محتوا د مخنیوی کونکي او د هدف جین کاپي شمیره لري.د نمونې حجم باید د حقیقي حالت په پام کې ونیول شي.د اړتیا په صورت کې د نیوکلیز پاک اوبو یا TE بفر په اضافه کولو سره نمونه کمه کړئ.
4. د مختلفو نمونو وړاندیز شوی حجم:
| نمونه | د یو 50 لپاره حجم μL غبرګون | اعظمي تناسب |
| ټول وینه انټيکوګولیټ | 2.5 μL | 5% |
| پلازما | 15 μL | 30% |
| سیروم | 10 μL | 20% |
| د ستوني پړسوب | 10 μL | 20% |
| لعاب | 10 μL | 20% |
د کیفیت کنټرول
1. د فعالیت کشف: د qPCR حساسیت، ځانګړتیا او تکرار وړتیا.
2. هیڅ خارجي نیوکلیز فعالیت نلري: هیڅ خارجي انډونیوکلیز او ایکسونوکلیز ککړتیا نلري.
د محصول یادښتونه
1. دا محصول د هاټ سټارټ DNA پولیمیریز نوی ډول کاروي، کوم چې په 1-5 دقیقو کې فعال کیدی شي. ځکه چې د دې عکس العمل بفر غوره شوی، دا د تحقیقاتو میتود په کارولو سره د ډبل یا څو فلوروسینس کمیتي PCR لپاره ډیر مناسب دی.
2. که چیرې د PCR امپلیفیکیشن Rn ارزښت ډیر ټیټ وي یا امپلیفیکیشن په څرګند ډول منع شوی وي، د نمونې مقدار کمول، د عکس العمل حجم زیاتول یا د نمونې پخوانی کمول ممکن پایلې ته وده ورکړي.
3. د وینې، لعاب، ادرار، د ستوني سویب، او نور راټولول باید د کلینیکي معیارونو اړتیاوې تعقیب کړي، او تازه نمونې د نیوکلیک اسید د تخریب مخنیوي لپاره کارول کیدی شي.
4. څرنګه چې مختلف امپلیکونونه د dUTP سره د کارونې مختلف موثریت او UNG ته حساسیت لري ، نو ریجنټونه باید غوره شي که چیرې د UNG سیسټم کارولو پرمهال د کشف حساسیت کم شي.مهرباني وکړئ د اړتیا په صورت کې د تخنیکي ملاتړ لپاره موږ سره اړیکه ونیسئ.
5. د یو مرحلې عکس العملونو ترمینځ د لیږدونکي PCR محصولاتو د پراخیدو څخه مخنیوي لپاره ، وقف شوي تجربه ساحه او پیپټ د پراخیدو لپاره اړین دي.د دستکشو سره عملیات وکړئ او په مکرر ډول بدل کړئ او د PCR امپلیفیکیشن وروسته د عکس العمل ټیوب مه خلاصوئ.
