5×Neoscript فاسټ RT-qPCR پریمکس پلس-UNG
بلی نمبر: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) یو خورا مستحکم یو ټیوب پروب پراساس مخلوط دی چې د یو ګام ریورس لیږد او کمیتي PCR (qRT-PCR) لپاره مناسب دی.دا د پریمرونو او پروبونو دمخه مخلوط کولو ملاتړ کوي او په ټیټ حرارت کې د اوږدې مودې ذخیره کولو وروسته مستحکم پاتې کیږي.د ازموینې لپاره نمونه مستقیم اضافه کیدی شي کله چې کارول کیږي ، پرته له اضافي ټیوب خلاصولو / پایپټینګ عملیاتو.دا محصول اجزا چمتو کوي، د بیلګې په توګه د ګرم پیل DNA پولیمیریز، M-MLV، د تودوخې لیبل uracil DNA glycosylase (TS-UNG)، RNase Inhibitor، MgCl2، dNTPs (د dTTP پرځای dUTP سره) ، او ثبات کونکي.د جینیکي پلوه ترمیم شوي ګړندي امپلیفیکیشن ریورس ټرانسکریپټیس او DNA پولیمریز سره ، دا ممکنه ده چې د PCR امپلیفیکیشن په 20-40 دقیقو کې بشپړ کړئ.دا ریجنټ د qPCR لپاره ځانګړي بفر کاروي د انزیبیټري امپلیفیکیشن انزایم او UNG انزایمونو مخلوط انزایمونو سره.له همدې امله، دا کولی شي د هدف جینونو ښه پراخوالی ترلاسه کړي او د PCR د پاتې کیدو او ایروسول ککړتیا له امله رامینځته شوي غلط پراخوالی مخه ونیسي.دا ریجنټ د تولید کونکو څخه د ډیری فلوروسینس مقداري PCR وسیلو سره مطابقت لري لکه اپلایډ بایو سیسټمونه ، ایپینډورف ، بایو راډ او روچ.
اجزا
1.25×Neoscript فاسټ RTase/UNG مکس
2.5×Neoscript فاسټ RT پریمکس بفر (dUTP)
د ذخیره کولو شرایط
ټولې برخې باید د اوږدې مودې ذخیره کولو لپاره -20 ℃ او تر 3 میاشتو پورې 4 ℃ وساتل شي.مهرباني وکړئ د کارولو دمخه د غوړولو او سینټرفیوج وروسته په ښه توګه سره مخلوط کړئ.د پرله پسې کنګل کیدو څخه ډډه وکړئ.
د qRT-PCR عکس العمل سیسټم چمتو کول
| اجزا | 25μLسیسټم | 50μLسیسټم | وروستی تمرکز |
| 5×Neoscript فاسټ RT پریمکس بفر (dUTP) | 5μL | 10μL | ۱× |
| 25×Neoscript فاسټ RTase/UNG مکس | 1μL | 2μL | ۱× |
| 25×Primer-Probe Mixa | 1μL | 2μL | ۱× |
| کينډۍ RNAb | – | – | – |
| ddH2O | تر 25μL پورې | تر 50μL پورې | – |
1) الف. د پریمر وروستی غلظت معمولا 0.2μM دی.د غوره پایلو لپاره، د پریمر غلظت د 0.2-1μM په حد کې مطلوب کیدی شي.عموما، د تحقیقاتو غلظت د 0.1-0.3μM په حد کې مطلوب کیدی شي.
2) b. کله چې د ګړندي PCR طرزالعمل وکاروئ ، د پرائمرونو او پروبونو غلظت زیاتول ممکن د غوره اضافې پایلې رامینځته کړي ، او د دوی تناسب باید د دې مطابق اصلاح شي.
3) د نمونو مختلف ډولونه مختلف ډولونه او محتوا د مخنیوی کونکي او د هدف جین کاپي شمیره لري.د نمونې حجم باید د حقیقي حالت په پام کې ونیول شي.که اړتیا وي، نمونه د نیوکلیز پاک اوبو یا TE بفر سره کم کړئ.
عکس العمل جشرطونه
| د PCR منظم پروسیجر | د PCR ګړندی پروسیجر | ||||||
| کړنلاره | تودوخه | وخت | سایکل | کړنلاره | تودوخه | وخت | سایکل |
| برعکس نقل | 50℃ | 10-20 دقیقې | 1 | برعکس نقل | 50℃ | ۵ دقیقې | 1 |
| پولیمیریز فعالول | 95℃ | 1-5 دقیقې | 1 | پولیمیریز فعالول | 95℃ | 30s | 1 |
| له منځه وړل | 95℃ | 10-20s | 40-50 | له منځه وړل | 95℃ | 1-3s | 40-50 |
| annealing او تمدید | 56-64℃ | 20-60s | annealing او تمدید | 56-64℃ | 3-20s | ||
د کیفیت کنټرول
1.د فعالیت کشف: د qPCR حساسیت، ځانګړتیا او تکرار وړتیا.
2.هیڅ exogenous nuclease فعالیت نشته: exogenous endonuclease او exonuclease ککړتیا نشته.
یادښتونه
1.د چټک DNA پولیمیریز د پراخولو کچه له 1kb/10s څخه کم نه ده.د PCR مختلف وسایل د تودوخې او یخولو مختلف سرعتونه، د تودوخې کنټرول طریقې او د تودوخې چلونکي لري، او په دې توګه ستاسو د پریمر/پروب غلظت او د چلولو طریقه ستاسو د ځانګړي چټک PCR وسیلې سره په ګډه اړینه ده.
2.دا محصول پراخه تطبیق کوي، او دا د لوړ حساسیت مالیکولر تشخیص لپاره مناسب دی.د درې مرحلې PCR طریقه د پریمرونو لپاره چې د ټیټ انیل کولو تودوخې سره یا د 200 bp څخه د اوږدې ټوټې پراخولو لپاره وړاندیز کیږي.
3.څرنګه چې مختلف امپلیکونونه د DUTP مختلف کارونې موثریت او UNG ته مختلف حساسیت لري ، نو ریجنټونه باید مطلوب شي که چیرې د UNG سیسټم کارولو پرمهال د کشف حساسیت کم شي.مهرباني وکړئ د اړتیا په صورت کې د تخنیکي ملاتړ لپاره موږ سره اړیکه ونیسئ.
4.د پی سی آر محصولاتو د لیږد څخه مخنیوي لپاره، وقف شوي تجربه ساحه او پایپټ د پراخولو لپاره اړین دي.د دستکشو سره عملیات وکړئ او په مکرر ډول بدل کړئ او د امپلیفیکیشن وروسته د PCR ټیوب مه خلاصوئ.
