وحشي ټیک DNA پولیمریز
Taq DNA Polymerase د Thermus aquaticus YT-1 څخه د تودوخې وړ DNA پولیمیریز دی، چې د 5′→ 3′ پولیمریز فعالیت او د 5´ فلیپ انډونیوکلیز فعالیت لري.
اجزا
| اجزا | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× طاق بفر | 2 × 1 ملی لیتر | 2 × 10 ملی لیتر | 2×50 ملی لیتر | 5 × 200 ملی لیتر |
| Taq DNA پولیمریز (5 U/μL) | 0.1 ملی لیتر | 1 ملی لیتر | 5 ملی لیتر | 5 × 10 ملی لیتر |
د ذخیره کولو حالت
تر 0°C لاندې ترانسپورت او په -25°C~-15°C کې زیرمه شي.
د واحد تعریف
یو واحد د انزایمونو مقدار په توګه تعریف شوی چې د 15 nmol dNTP په 30 دقیقو کې د 75 درجې سانتي ګراد په تیزاب کې ناحلونکي موادو کې شاملوي.
د کیفیت کنټرول
1.د پروټین پاکوالي ارزونه (SDS-PAGE):د Taq DNA پولیمیریز پاکوالی ≥95٪ د SDS-PAGE تحلیل لخوا ټاکل شوی.
2.Endonuclease فعالیت:په 37 ℃ کې د 16 ساعتونو لپاره د 1 μg λDNA سره د تاق DNA پولیمیریز لږترلږه 5 U د 16 ساعتونو لپاره په 37 ℃ کې د تشخیص وړ تخریب پایله نلري.
3.Exonuclease فعالیت:د 1 μg λ -Hind Ⅲ د 16 ساعتونو لپاره په 37 ℃ کې د DNA هضم کولو سره لږ تر لږه 5 U Taq DNA پولیمیریز په پایله کې هیڅ ډول د کشف وړ تخریب نه کیږي.
4.د نیکیس فعالیت:د 1 μg pBR322 DNA سره لږ تر لږه 5 U د تاق DNA پولیمیریز د 16 ساعتونو لپاره په 37 درجې سانتي ګراد کې د تشخیص وړ تخریب پایله نلري.
5.د RNase فعالیت:د 1.6 μg MS2 RNA سره لږ تر لږه 5 U د تاق DNA پولیمیریز د 16 ساعتونو لپاره په 37 درجې سانتي ګراد کې د تشخیص وړ تخریب پایله نلري.
6.ای کولیDNA:د Taq DNA پولیمیریز 5 U د E. coli genomic DNA د شتون لپاره د TaqMan qPCR په کارولو سره د E. coli 16S rRNA لوکس لپاره ځانګړي پریمر سره سکرین شوی.د E. کولی جینومیک DNA ککړتیا ≤1 کاپي ده.
7.د PCR امپلیفیکیشن (5.0 kb Lambda DNA)- د 50 µL عکس العمل چې 5 ng Lambda DNA لري د 5 واحدونو Taq DNA پولیمریز سره د PCR امپلیفیکیشن 25 دورې لپاره د 5.0 kb محصول تمه کیږي.
د عکس العمل تنظیم کول
| اجزا | حجم |
| کينډۍ DNAa | اختیاري |
| 10 μM فارورډ پریمر | 1 μL |
| 10 μM ریورس پریمر | 1 μL |
| dNTP مکس (10mm هر یو) | 1 μL |
| 10×طاق بفر | 5 μL |
| تاک DNA پولیمریزب | 0.25 μL |
| له نیوکلیز پاکې اوبه | تر 50 μL پورې |
یادونه:
1) د مختلف ټیمپلیټونو غوره عکس العمل غلظت مختلف دی.لاندې جدول د 50 µL عکس العمل سیسټم وړاندیز شوي ټیمپلیټ کارول ښیې.
| DNA | مقدار |
| جینومیک | 1 ng-1 μg |
| پلاسمیډ یا ویروس | 1 pg-1 ng |
2) د Taq DNA Polymerase مطلوب غلظت ممکن د 0.25 µL ~ 1 µL پورې په ځانګړو غوښتنلیکونو کې وي.
غبرګونپروګرام
| ګام | دحرارت درجه((°C) | وخت | سایکلونه |
| ابتدايي تخریبa | 95 ℃ | ۵ دقیقې | - |
| له منځه وړل | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 سایکلونه |
| annealingب | 60 ℃ | 15 s | |
| تمدید | 72 ℃ | 1kb/min | |
| وروستی تمدید | 72 ℃ | ۵ دقیقې | - |
یادونه:
1) د ابتدايي تخریب حالت د ډیری امپلیفیکیشن تعاملاتو لپاره مناسب دی او د ټیمپلیټ جوړښت پیچلتیا سره سم تعدیل کیدی شي.که د کينډۍ جوړښت پېچلی وي، د لومړني تخريب اغېز د ښه کولو لپاره د ډينيټوريشن څخه مخکې وخت 5 – 10 دقيقو ته غځول کېدای شي.
2) د انیل کولو تودوخه باید د پریمر د Tm ارزښت سره سم تنظیم شي، کوم چې عموما د پریمر د Tm ارزښت څخه 3 ~ 5 ℃ ټیټ وي؛د پیچلو ټیمپلیټونو لپاره ، دا اړینه ده چې د انیل کولو تودوخې تنظیم کړئ او د توسع کولو وخت وغزوئ ترڅو د مؤثره امپلیفیکیشن ترلاسه کړي.
