سوپر سټارټ qPCR پریمکس پلس-UNG
بلی نمبر: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG یو ځانګړی ریجنټ دی چې د ریښتیني وخت PCR کیفیت او کمیتي عکس العملونو لپاره ډیزاین شوی چې د تحقیقاتو پراساس کشف په کارولو سره په ځانګړي ډول د لیوفیلائزیشن پروسو لپاره رامینځته شوی.دا یو نوی هاټ سټارټ انزایم Hotstart Taq plus (DG) لري، کوم چې د دې د Taq انزایم فعالیت د خونې په تودوخې کې بند شوی دی، په مؤثره توګه د غیر مشخص پراخوالي مخه نیسي چې د پریمر غیر مشخص انیل کولو یا پریمر ډیمر جوړښت له امله رامینځته کیږي د ټیټ تودوخې شرایطو کې ، پدې توګه وده کوي. د امپلیفیکیشن غبرګون ځانګړتیا.دا ریجنټ د qPCR ځانګړي بفر او UNG/dUTP ضد ککړتیا سیسټم کاروي ترڅو ګړندي ګرم پیل ترلاسه کړي ، د qPCR عکس العملونو موثریت او حساسیت خورا ښه کوي.دا کولی شي په پراخه کچه د مقدار کولو ساحو کې ښه معیاري وکرونه ترلاسه کړي او په دقیقه توګه مقدار ترسره کړي ، په مؤثره توګه د پاتې PCR محصولاتو یا ایروسول ککړتیا له امله رامینځته شوي غلط مثبت لوړیدو مخه نیسي.دا ریجنټ د تولید کونکو څخه د ډیری فلوروسینټ کمیتي PCR وسیلو سره مطابقت لري لکه اپلایډ بایو سیسټمونه ، ایپینډورف ، بایو راډ او روچ وغيره ، او په لیوفیلیز شکل کې ښه ثبات ښیې.
د ریجنټ ترکیب
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+وړیا) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4× لیو پروټیکټینټ (اختیاري)
د ذخیره کولو شرایط
د اوږدې مودې ذخیره په -20 ℃ کې؛تر 3 میاشتو پورې په 4 ℃ کې زیرمه کیدی شي.د کارولو دمخه ښه مخلوط کړئد بار بار یخولو او غوړیدو څخه مخنیوی وکړئ.
د سایکل چلولو پروتوکول
| کړنلاره | تودوخه | وخت | سایکل |
| هضم | 50℃ | 2 دقیقې | 1 |
| د پولیمیریز فعالول | 95℃ | ۱~۵ دقیقې | 1 |
| ډینچر | 95℃ | 10~20 ثانیې | 40-50 |
| انیلینګ او غزول | 56~64℃ | 20 ~ 60 ثانیې | 40-50 |
qPCR د مایع عکس العمل Syد ډډ چمتو کول
|
ترکیب |
25µL حجم |
50µL حجم |
وروستی تمرکز |
| 5×HotstartPremix پلس-UNG(مګ2+وړیا) (DG) | 5µL | 10µL | ۱× |
| 250mm MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 mM |
| 4× lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | ۱× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | ۱× |
| کينډۍ DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | تر 25µL پورې | تر 50µL پورې | —— |
1. د پریمرونو لپاره د 0.2μM وروستی غلظت معمولا ښه پایلې ورکوي.کله چې د عکس العمل فعالیت ضعیف وي ، د اړتیا سره سم د 0.2-1μM حد کې د پریمر غلظت تنظیم کړئ.د تفتیش غلظت عموما د 0.1-0.3μM په حد کې د تدریجي تجربو له لارې غوره کیږي ترڅو غوره ترکیبونه ومومي.
2. د هدف جینونو د نقل شمیره چې په بیلابیلو ډولونو کې شتون لري توپیر لري؛که اړتیا وي، تدریجي کمول ترسره کیدی شي ترڅو د غوره نمونې اضافه مقدار مشخص کړي.
3. دا سیسټم کولی شي lyophilized شي؛کله چې پیرودونکي دا سیسټم د یخولو - وچولو اړتیاو پرته کاروي، 4 × لایپروټیکټینټ په انتخابي ډول اضافه کیدی شي؛ که چیرې د یخ وچ شوي محصولاتو اړتیا وي، د مایع ریجنټ مرحلې د محصول فعالیت تصدیق کولو په جریان کې، دا باید 4 × لایپروټیکټینټ اضافه کړي ترڅو د لیوفیلیز سیسټم اجزاو سره دوام ومومي. او اغیزې.
کله چې سیسټم کارول کیږيد منجمد وچولو لپاره، چمتو کړئ سیسټم as لاندې
| ترکیب | 25µL د غبرګون سیسټم |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+وړیا) (DG) | 5µL |
| 250mm MgCl2 | 0.45µL |
| 4× lyoprotectant | 6.25µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | تر 18~20µL |
* که د یخ وچولو لپاره نور سیسټمونو ته اړتیا وي، مهرباني وکړئ په جلا توګه مشوره وکړئ.
د Lyophilization پروسهss
| کړنلاره | تودوخه | وخت | حالت | فشار |
| پری یخ کول | 4℃ | 30 دقیقې | نیول |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 دقیقې | کولنګ | ||
| -50 ℃ | 180 دقیقې | نیول | ||
| لومړني وچول | -30 ℃ | 60 دقیقې | ګرمول |
حتمي خلا |
| -30 ℃ | 70 دقیقې | نیول | ||
| ثانوي وچول | 25℃ | 60 دقیقې | ګرمول |
حتمي خلا |
| 25℃ | 300 دقیقې | نیول |
2. پورتني lyophilization پروسه یوازې د حوالې لپاره ده.د محصول مختلف ډولونه او مختلف فریز وچونکي مختلف پیرامیټونه لري ، نو د حقیقي سره سم تنظیم کیدی شيد کارولو پر مهال شرایط.
3. د لیوفیلیز کولو مختلف پروسې ممکن د لیوفیلیز شوي مختلف بیچ اندازې لپاره مناسب ويمحصولات ، نو د کافي ازموینې تصدیق باید ترسره شي کله چې د لوی کچې تولید لپاره کارول کیږي.
د لیوفیلیز کارولو لپاره لارښوونېد پوډر
1. په لنډه توګه د لیوفیلیز پوډر سینټرفیوج؛
2. د لیوفیلیز پوډر ته د نیوکلیک اسید ټیمپلیټ اضافه کړئ او تر 25µL پورې اوبه اضافه کړئ؛
3. د سنټرفیوګریشن پواسطه ښه مخلوط کړئ او په ماشین کې چل کړئ.
د کیفیت کنټرول:
1. فعلي ازموینه: د qPCR حساسیت، ځانګړتیا، د تولید وړتیا.
2. هیڅ خارجي نیوکلیز فعالیت نلري، هیڅ خارجي اندو/ایکسونوکلیز ککړتیا نلري.
تخنیکي معلومات:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG یو نوی هاټ سټارټ انزایم کاروي چې په 1~ 5 دقیقو کې د ګړندي ګرم پیل کولو وړتیا ورکوي.د ځانګړي بفر فارمولیشن له لارې دا د ملټي پلیکس فلوروسینټ کمیتي PCR عکس العملونو لپاره مناسب دی.
2. دا لوړ ځانګړتیا لري کوم چې د پام وړ د فلوروسینس کمیتي PCR محدودیت کشف حساسیت ته وده ورکوي ، د امپلیفیکیشن منحني نورمال کولو رامینځته کوي ، د فلوروسینس ارزښت په ټیټ غلظت ټیمپلیټونو کې څرګند پرمختګ ترلاسه کوي ، د لوړ حساسیت فلوروسینس مقداري PCR کشف ریجنټونو په توګه مناسب.
3. د پرائمرونو لپاره چې د ټیټ انیل کولو تودوخې یا له 200bp څخه ډیر اوږد وي ، د 3 مرحلو میتود وړاندیز کیږي.
4. د DUTP کارولو موثریت او د UNG انزایمونو سره حساسیت د مختلف هدف جینونو لپاره توپیر لري، په دې توګه که د UNG سیسټم کارول د کشف حساسیت کمیدو لامل شي، د غبرګون سیسټم باید تنظیم او اصلاح شي.که تخنیکي ملاتړ ته اړتیا وي مهرباني وکړئ زموږ شرکت سره اړیکه ونیسئ.
5. د پراخولو دمخه او وروسته وقف شوي ساحې او پایپټ وکاروئ، د عملیاتو پرمهال دستکشې واغوندئ او په مکرر ډول یې بدل کړئ؛د PCR بشپړیدو وروسته د عکس العمل ټیوب مه خلاصوئ ترڅو د PCR محصولاتو لخوا د نمونو ککړتیا کمه شي.
