پروټینز K mNGS (مایع)
پروټینز K یو مستحکم سیرین پروټیز دی چې د پراخه سبسټریټ ځانګړتیا سره.دا په اصلي حالت کې حتی د صابون په شتون کې ډیری پروټینونه تخریب کوي.د کرسټال او مالیکولر جوړښت مطالعاتو څخه شواهد په ګوته کوي چې انزایم د سبټیلیسین کورنۍ پورې اړه لري چې د فعال سایټ کتلیتیک ټریډ (Asp.39- د هغه69-سر۲۲۴).د تخریب اصلي ځای د پیپټایډ بانډ دی چې د الفا امینو ګروپونو سره د بند شوي الفا امینو اسیدونو سره د الفاټیک او اروماتیک امینو اسیدونو کاربوکسیل ګروپ سره نږدې دی.دا معمولا د خپل پراخه ځانګړتیا لپاره کارول کیږي.دا پروټیناس K په ځانګړي ډول د mNGS لپاره ډیزاین شوی.د نورو پروټیناز K سره په پرتله، دا د ورته انزیماتیک فعالیت سره حتی لږ نیوکلیک اسید ککړتیا لري، کوم چې کولی شي د لاندې MNGS غوښتنلیک په ښه توګه ډاډمن کړي.
د ذخیره کولو شرایط
2-8 ℃ د 2 کلونو لپاره
مشخصات
| بڼه | بې رنګه تر روښانه نسواري مایع |
| فعالیت | ≥800 U/ml |
| د پروټین غلظت | ≥20 mg/ml |
| نیکیس | هیڅ ونه موندل شو |
| DNase | هیڅ ونه موندل شو |
| RNase | هیڅ ونه موندل شو |
ملکیتونه
| د EC شمیره | 3.4.21.64(د ټریټراچیم البم څخه بیا ترکیب) |
| isoelectric point | 7.81 |
| غوره pH | 7.0- 12.0 انځور 1 |
| غوره تودوخه | 65 ℃ انځور 2 |
| د pH ثبات | pH 4.5- 12.5 (25 ℃، 16 h) انځور 3 |
| حرارتي ثبات | لاندې د 50 ℃ (pH 8.0، 30 min) انځور 4 |
| د ذخیره کولو ثبات | په 25 ℃ کې د 12 میاشتو لپاره د 90٪ څخه ډیر فعالیت |
| فعالونکي | SDS، یوریا |
| مخنیوی کوونکي | ډیسوپروپیل فلوروفاسفیټ؛phenylmethylsulfonyl فلورایډ |
غوښتنلیکونه
1. د جینیاتي تشخیص کټ
2. د RNA او DNA استخراج کټونه
3. د نسجونو څخه د غیر پروټین اجزا استخراج، د پروټین ناپاکۍ تخریب، لکه DNAواکسین او د هیپرین چمتو کول
4. د کروموزوم DNA چمتو کول د نبض الیکٹروفورسیس په واسطه
5. لویدیځ داغ
6. د ویټرو تشخیص کې انزیماتیک ګلایکوسیلیټ البومین ریجنټونه
وقایې
د کارولو یا وزن کولو پرمهال محافظتي دستکشې او چشمې واغوندئ او د کارولو وروسته ښه هوا وساتئ.دا محصول ممکن د پوټکي الرجیک عکس العمل او د سترګو جدي خارش لامل شي.که تنفس شي، دا کیدای شي د الرجی یا د اسما د نښې نښانې یا ډیسپنیا سبب شي.کیدای شي د تنفسي خارښ لامل شي.
د واحد تعریف
یو واحد (U) د انزایم مقدار په توګه تعریف شوی چې د 1 μmol تولید لپاره کیسین هایدرولیس ته اړتیا لريپه لاندې شرایطو کې په یوه دقیقه کې tyrosine.
Reagents چمتو کول
Reagent I: 1g د شیدو کیسین د 0.1M سوډیم فاسفیت محلول (pH 8.0) په 50ml کې منحل شوی، د 65-70 ℃ په اوبو کې د 15 دقیقو لپاره مینځل شوی، یخ شوی او منحل شوی، د اوبو په واسطه یخ شوی، د سوډیم هایدروکسایډ لخوا د pH 8.0 حجم سره سمون لري. 100ml.
Reagent II: 0.1M trichloroacetic acid، 0.2M sodium acetate، 0.3M acetic acid.
III Reagent: 0.4M Na2CO3حل
IV Reagent: Forint reagent د 5 ځلو لپاره په پاکو اوبو ککړ شوی.
Reagent V: د انزایم کمول: 0.1M سوډیم فاسفیت محلول (pH 8.0).
VI Reagent: tyrosine محلول: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml tyrosine د 0.2 سره منحلM HCl.
کړنلاره
1. 0.5 ملی لیتر ریجنټ I مخکې له دې چې تودوخه 37 ℃ ته تودوخه شي، د انزایم محلول 0.5 ملی لیتره اضافه کړئ، ښه مخلوط کړئ، او په 37 درجو کې سینګار کړئ.د 10 دقیقو لپاره 37 ℃.
2. د عکس العمل د بندولو لپاره 1ml reagent II اضافه کړئ، ښه مخلوط کړئ او د 30 دقیقو لپاره انکیوبیشن ته دوام ورکړئ.
3. Centrifugate غبرګون محلول.
4. 0.5ml سوپرناټینټ واخلئ، 2.5ml reagent III، 0.5ml reagent IV اضافه کړئ، ښه مخلوط کړئ او په 37℃ کې سینه کړئد 30 دقیقو لپاره.
5. OD۶۶۰د OD په توګه ټاکل شوی1;خالي کنټرول ګروپ: 0.5ml reagent V د انزایم ځای په ځای کولو لپاره کارول کیږيد OD ټاکلو لپاره حل۶۶۰د OD په توګه2, ΔOD=OD1-OD2.
6. د L-tyrosine معیاري وکر: 0.5mL مختلف غلظت L-tyrosine محلول، 2.5mL reagent III، 0.5mL reagent IV په 5mL سینټرفیوج ټیوب کې، په 37℃ کې د 30mins لپاره انکیوبیټ، د OD لپاره کشف۶۶۰د L-tyrosine د مختلف غلظت لپاره، بیا معیاري وکر Y=kX+b ترلاسه کړ، چیرته چې Y د L-tyrosine غلظت دی، X OD دی۶۰۰.
محاسبه
2: د عکس العمل ټول حجم (mL)
0.5: د انزایم محلول حجم (mL)
0.5: د تعامل مایع حجم چې په کروموجنیک تعیین کې کارول کیږي (mL)
10: د عکس العمل وخت (منټ)
Df: ګڼه ګوڼه کمول
Cد انزایم غلظت (mg/mL)
حوالې
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(١٩٧٢);۲۳:۷۷
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.بایوفیس.Res.کمیون.(١٩٧١);۴۴:۵۱۳
3. هیلز، ایچ.او نوریورو.J. بایوکیم.(١٩٧٥);56:103-108.
4. سمبروک جet al. مالیکولر کلونینګ: د لابراتوار لارښود، دویمه نسخه، د پسرلي سړه هاربرلابراتوار پریس، د سړه پسرلي هاربر (1989).
ارقام
اينځر.1 غوره pH
د 100mM بفر حل: pH6.0-8.0، Na-phosphate؛pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5، Glycine-NaOH. انزایم غلظت: 1mg/mL
انځور. 2 غوره تودوخه
عکس العمل په 20 mm K-phosphate buffer pH 8.0 کې.د انزایم غلظت: 1 mg/mL
انځور.3 pH ثبات
25 ℃، 16 h-درملنه د 50 mM بفر حل سره: pH 4.5- 5.5، Acetate؛pH 6.0-8.0، Na-phosphate؛pH 8.0-9.0، Tris-HCl.pH 9.0- 12.5، Glycine-NaOH.د انزایم غلظت: 1 mg/mL
انځور 4 حرارتي ثبات
30 دقیقې درملنه د 50 mm Tris-HCl بفر سره، pH 8.0.د انزایم غلظت: 1 mg/mL
انځور 5 ذخیره کول ثباتty at 25℃
