پروټینز K (مایع)
د بلی شمیره: HC4502A
پروټینز K یو مستحکم سیرین پروټیز دی چې د پراخه سبسټریټ ځانګړتیا سره.دا په اصلي حالت کې حتی د صابون په شتون کې ډیری پروټینونه تخریب کوي.د کرسټال او مالیکولر جوړښت مطالعاتو څخه شواهد په ګوته کوي چې انزایم د سبټیلیسین کورنۍ پورې اړه لري چې د فعال سایټ کتلیتیک ټریډ (Asp.39- د هغه69- سر۲۲۴).د تخریب اصلي ځای د پیپټایډ بانډ دی چې د الفا امینو ګروپونو سره د بند شوي الفا امینو اسیدونو سره د الفاټیک او اروماتیک امینو اسیدونو کاربوکسیل ګروپ سره نږدې دی.دا معمولا د هغې د پراخو لپاره کارول کیږيځانګړتیا
مشخصات
بڼه | بې رنګه تر روښانه نسواري مایع |
فعالیت | ≥800 U/ml |
د پروټین غلظت | ≥20 mg/ml |
DNase | هیڅ ونه موندل شو |
RNase | هیڅ ونه موندل شو |
د ذخیره کولو شرایط
د 2-8 ℃ د حرارت درجه ذخیره کړئ.
ملکیتونه
د EC شمیره | 3.4.21.64 (Rد تریټراچیم البم څخه ecombinant) |
مالیکولر وزن | 29 kDa (SDS-PAGE) |
isoelectric point | 7.81 |
غوره pH | 7.0-12.0 انځور.1 |
غوره تودوخه | 65 ℃ انځور.2 |
د pH ثبات | pH 4.5-12.5 (25℃, 16 h) انځور.3 |
حرارتي ثبات | لاندې 50℃ (pH 8.0، 30 دقیقې) انځور.4 |
فعالونکي | SDS، یوریا |
مخنیوی کوونکي | ډیسوپروپیل فلوروفاسفیټ؛phenylmethylsulfonyl فلورایډ |
غوښتنلیکونه
1. د جینیاتي تشخیص کټ
2. د RNA او DNA استخراج کټونه
3. د نسجونو څخه د غیر پروټین اجزاو استخراج، د پروټین ناپاکۍ تخریب، لکه د DNA واکسین او د هیپرین چمتو کول
4. د کروموزوم DNA چمتو کول د نبض الیکٹروفورسیس په واسطه
5. لویدیځ داغ
6. د ویټرو تشخیص کې انزیماتیک ګلایکوسیلیټ البومین ریجنټونه
وقایې
د کارولو یا وزن کولو پرمهال محافظتي دستکشې او چشمې واغوندئ او د کارولو وروسته ښه هوا وساتئ.دا محصول ممکن د پوټکي الرجیک عکس العمل او د سترګو جدي خارش لامل شي.که تنفس شي، دا کیدای شي د الرجی یا د اسما د نښې نښانې یا ډیسپنیا سبب شي.کیدای شي د تنفسي خارښ لامل شي.
Assay
د واحد تعریف
یو واحد (U) په لاندې شرایطو کې په یوه دقیقه کې د 1 μmol tyrosine تولید لپاره د کیسین هایدرولیس کولو لپاره اړین انزایم مقدار تعریف شوی.
Reagents چمتو کول
Reagent I: 1g د شیدو کیسین د 0.1M سوډیم فاسفیت محلول (pH 8.0) په 50ml کې منحل شوی، د 65-70 ℃ په اوبو کې د 15 دقیقو لپاره مینځل شوی، یخ شوی او منحل شوی، د اوبو په واسطه یخ شوی، د سوډیم هایدروکسایډ لخوا pH8.0 ته تنظیم شوی، او حل شوی. حجم 100ml
Reagent II: TCA محلول: 0.1M trichloroacetic acid، 0.2M sodium acetate، 0.3M acetic acid.
III Reagent: 0.4M Na2CO3حل
IV Reagent: Forint reagent د 5 ځلو لپاره په پاکو اوبو ککړ شوی.
Reagent V: د انزایم کمول: 0.1M سوډیم فاسفیت محلول (pH 8.0).
VI Reagent: Tyrosine محلول: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml tyrosine د 0.2M HCl سره منحل.
کړنلاره
1. 0.5ml reagent I مخکې تر 37℃ پورې تودوخه کیږي، 0.5ml د انزایم محلول اضافه کړئ، ښه مخلوط کړئ، او د 10 دقیقو لپاره په 37℃ کې سینګار کړئ.
2. د عکس العمل د بندولو لپاره 1ml reagent II اضافه کړئ، ښه مخلوط کړئ او د 30 دقیقو لپاره انکیوبیشن ته دوام ورکړئ.
3. Centrifugate غبرګون محلول.
4. 0.5ml supernatant واخلئ، 2.5ml reagent III، 0.5ml reagent IV اضافه کړئ، ښه مخلوط کړئ او د 30 دقیقو لپاره په 37 ℃ کې سینه کړئ.
5. OD۶۶۰د OD په توګه ټاکل شوی1;خالي کنټرول ګروپ: 0.5ml reagent V د OD ټاکلو لپاره د انزایم محلول ځای په ځای کولو لپاره کارول کیږي۶۶۰د OD په توګه2, ΔOD=OD1-OD2.
6. د L-tyrosine معیاري وکر: 0.5mL مختلف غلظت L-tyrosine محلول، 2.5mL reagent III، 0.5mL reagent IV په 5mL سینټرفیوج ټیوب کې، په 37℃ کې د 30mins لپاره انکیوبیټ، د OD لپاره کشف۶۶۰د L-tyrosine د مختلف غلظت لپاره، بیا معیاري وکر Y=kX+b ترلاسه کړ، چیرته چې Y د L-tyrosine غلظت دی، X OD دی۶۰۰.
محاسبه
2: د عکس العمل ټول حجم (mL)
0.5: د انزایم محلول حجم (mL)
0.5: د تعامل مایع حجم چې په کروموجنیک تعیین کې کارول کیږي (mL)
10: د عکس العمل وخت (منټ)
Df: ګڼه ګوڼه کمول
Cد انزایم غلظت (mg/mL)
حوالې
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(١٩٧٢);۲۳:۷۷
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.بایوفیس.Res.کمیون.(١٩٧١);۴۴:۵۱۳
3. هیلز، ایچ.او نوریورو.J. بایوکیم.(١٩٧٥);56:103-108.
4. سمبروک جet al. مالیکولر کلونینګ: د لابراتوار لارښود، دویمه نسخه، د سړه پسرلي هاربر لابراتوار پریس، د سړه پسرلي هاربر (1989).
ارقام
اينځر. 1 غوره pH
د 100mM بفر حل: pH6.0-8.0، Na-phosphate؛pH8.0- 9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5، Glycine-NaOH. انزایم غلظت: 1mg/mL
انځور 2 غوره تودوخه
په 20mm K-phosphate buffer pH 8.0 کې غبرګون.د انزایم غلظت: 1mg/mL
انځور 3 pH ثبات
25℃،16 د 50mm بفر محلول سره درملنه: pH 4.5-5.5، Acetate؛pH 6.0-8.0، Na-phosphate؛pH 8.0-9.0، Tris-HCl.pH 9.0-12.5، Glycine-NaOH.د انزایم غلظت: 1mg/mL
شکل 4 حرارتي ثبات
30 دقیقې درملنه د 50mM Tris-HCl بفر سره، pH 8.0.د انزایم غلظت: 1mg/mL
انځور 5 ذخیره کول ثباتty at 25℃