Uracil DNA Glycosylase
Uracil-DNA Glycosylase (UNG یا UDG) د 25 kDa مالیکولر وزن سره د E.coli یو بیا جوړونکی کلون دی.دا د uracil څخه د وړیا uracil خوشې کول د واحد-Standed او Double Stranded DNA څخه خلاصوي، او د RNA په وړاندې غیر فعال دي، او د PCR امپلیفیکیشن محصولاتو د ککړتیا مخنیوي لپاره کارول کیدی شي.د عمل اصول د دې حقیقت پراساس دي چې که dUTP د PCR عکس العمل کې د dTTP لپاره ځای په ځای شي او د PCR امپلیفیکیشن محصول چې dU اډې لري رامینځته شي ، انزایم کولی شي په انتخابي ډول د U بیسونو ګلایکوسیډیک بانډ په واحد او دوه اړخیزه کې مات کړي. DNA او د PCR امپلیفیکیشن محصول خرابوي.
وړاندیز شوی غوښتنلیک
د ککړتیا مخنیوی پراخول
د ذخیره کولو حالت
-20 ° C د اوږدې مودې ذخیره کولو لپاره، باید د کارولو دمخه ښه مخلوط شي، د بار بار کنګل کیدو څخه مخنیوی وشي.
د ذخیره کولو بفر
20 mm Tris-HCl (pH 8.0)، 150 mm NaCl، 1 mM EDTA، 1 mM DTT، سټیبلائزر، 50٪ ګیلیسرول.
د واحد تعریف
د انزایم اندازه چې د 1µg واحد ډنډ شوي DNA تخریب کولو لپاره اړین دي چې د dU اډې لري په 1 ساعت کې په 37 درجې سانتي ګراد کې 1 واحد دی.
د کیفیت کنټرول
1.د SDS-PAGE الکتروفوریټیک پاکوالی له 98٪ څخه ډیر
2.د امپلیفیکیشن حساسیت، د بیچ څخه تر بیچ کنټرول، ثبات
3.وروسته له دې چې د UNG 1U د 2mins لپاره په 50℃ کې درملنه کیږي، هغه ټیمپلیټ چې U د 103 څخه ښکته کاپي لري باید په بشپړ ډول تخریب شي او هیڅ پراخیدونکي محصول تولید نشي.
4.هیڅ خارجي نیوکلیز فعالیت نلري
لارښوونې
| اجزا | حجم (μL) | وروستی تمرکز |
| 10 × PCR بفر (dNTP وړیا، Mg²+وړیا) | 5 | ۱× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (د dTTP ځای په ځای کول) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × پریمر مکسa | 2 | ۱× |
| کينډۍ | - | ＜1μg/ عکس العمل |
| ddH₂O | تر 50 پورې | - |
یادونه: الف: که د qPCR/qRT-PCR لپاره کارول کیږي، د فلوروسینټ تحقیقات باید د غبرګون سیسټم کې اضافه شي.عموما، د 0.2 μM وروستی پریمر غلظت کولی شي ښه پایلې ورکړي؛کله چې د عکس العمل فعالیت ضعیف وي ، د پریمر غلظت د 0.2-1 μM په حد کې تنظیم کیدی شي.عموما، د تحقیقاتو غلظت د 0.1-0.3 μM په حد کې مطلوب دی.د غلظت تدریجي تجربې د پریمر او تحقیقاتو غوره ترکیب موندلو لپاره ترسره کیدی شي.
یادښتونه
1.UNG انزایم د PCR امپلیفیکیشن عکس العمل دمخه د عکس العمل سیسټم څخه د ککړ شوي dUTP امپلیفیکیشن محصولاتو لرې کولو لپاره کارول کیدی شي ، بیا د محصول ککړتیا له امله د غلط مثبت پایلو څخه مخنیوي لپاره.
2.د UNG انزایم لپاره مطلوب تودوخه د ککړتیا ضد PCR عکس العمل کې کارول کیږي عموما د 2 دقیقو لپاره 50 ℃ دی؛د غیر فعال کیدو حالت د 5 دقیقو لپاره 95 ℃ دی.
3.د بار بار کنګل کیدو څخه ډډه وکړئ، او د تودوخې لوی بدلونونو سره مخ مه کوئ.
4.مختلف جینونه چې باید پراخ شي د dUTP مختلف کارولو موثریت او د UNG انزایمونو حساسیت لري ، نو له همدې امله ، که د UNG سیسټم کارول د کشف حساسیت کمیدو لامل شي ، د عکس العمل سیسټم باید تنظیم او اصلاح شي ، که تاسو تخنیکي ملاتړ ته اړتیا لرئ ، مهرباني وکړئ اړیکه ونیسئ زموږ شرکت
