پروټینز K NGS (پاؤډر)
بلی نمبر: HC4507A
NGS پروټیز K یو باثباته سیرین پروټیز دی چې د لوړ انزایم فعالیت او پراخه سبسټریټ ځانګړتیا لري. دا انزایم په ترجیحي ډول د هایدروفوبیک امینو اسیدونو ، سلفر لرونکي امینو اسیدونو او اروماتیک امینو اسیدونو C-ټرمینل سره نږدې د ایسټر بانډونه او پیپټایډ بانډونه تخریب کوي.نو، دا ډیری وختونه په لنډ پیپټایډونو کې د پروټینونو تخریب کولو لپاره کارول کیږي.NGS پروټیز K د Asp سره یو ځانګړی سیرین پروټیز دی39- د هغه69-سر۲۲۴کټالیټیک ټریډ چې د سیرین پروټیزونو لپاره ځانګړی دی او د کتلیتیک مرکز د ټو Ca لخوا محاصره دی2+د ثبات لپاره پابند سایټونه، د پراخو شرایطو لاندې د لوړ انزایم فعالیت ساتل.
مشخصات
| بڼه | له سپین څخه تر سپینه بې مورفوس پوډر، لیوفیلیز شوی |
| ځانګړی فعالیت | ≥40U/mg جامد |
| DNase | هیڅ ونه موندل شو |
| RNase | هیڅ ونه موندل شو |
| Bioburden | ≤50CFU/g جامد |
| د نیوکلیک اسید پاتې شوني | <5pg/mg جامد |
ملکیتونه
| سرچینه | د ټریټراچیم البوم |
| د EC شمیره | 3.4.21.64(د ټریټراچیم البم څخه بیا ترکیب) |
| مالیکولر وزن | 29kDa (SDS-PAGE) |
| isoelectric point | 7.81 انځور.1 |
| غوره pH | 7.0-12.0 (ټول لوړ فعالیت ترسره کوي) انځور.2 |
| غوره تودوخه | 65℃ انځور.3 |
| د pH ثبات | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) انځور.4 |
| حرارتي ثبات | لاندې 50℃ (pH 8.0, 30min) انځور.5 |
| د ذخیره کولو ثبات | د 12 میاشتو لپاره په 25℃ کې زیرمه شوی انځور.6 |
| فعالونکي | SDS، یوریا |
| مخنیوی کوونکي | ډیسوپروپیل فلوروفاسفیټ؛بینزیل سلفونیل فلورایډ |
د ذخیره کولو شرایط
لیوفیلیز پوډر په -25~-15 ℃ کې د اوږدې مودې لپاره د رڼا څخه لرې وساتئ؛د منحل کیدو وروسته، الیکوټ د لنډ مهاله ذخیره کولو لپاره په مناسب حجم کې په 2-8 ℃ کې د رڼا څخه لرې یا اوږد مهاله ذخیره -25 ~ -15 ℃ د رڼا څخه لیرې.
وقایې
د کارولو یا وزن کولو پرمهال محافظتي دستکشې او چشمې واغوندئ او د کارولو وروسته ښه هوا وساتئ.دا محصول ممکن د پوټکي الرجیک عکس العمل او د سترګو جدي خارش لامل شي.که تنفس شي، دا کیدای شي د الرجی یا د اسما د نښې نښانې یا ډیسپنیا سبب شي.کیدای شي د تنفسي خارښ لامل شي.
د واحد تعریف
د NGS پروټیز K یو واحد د معیاري تعیین شرایطو لاندې په 1 μmol L-tyrosine کې د کیسین هایدرولیس کولو لپاره اړین انزایم مقدار تعریف شوی.
Reagents چمتو کول
| Reagent | جوړونکی | کتلاګ |
| کیسین تخنیکيد غواګانو شیدو څخه | سیګما الدریچ | C7078 |
| NaOH | سینوفرم کیمیاويReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4· 2H2O | سینوفرم کیمیاويReagent Co., Ltd. | ۲۰۰۴۰۷۱۸ |
| Na2HPO4 | سینوفرم کیمیاويReagent Co., Ltd. | ۲۰۰۴۰۶۱۸ |
| Trichloroacetic اسید | سینوفرم کیمیاويReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| سوډیم اسټیټ | سینوفرم کیمیاويReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| Acetic اسید | سینوفرم کیمیاويReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | سینوفرم کیمیاويReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| سوډیم کاربونیټ | سینوفرم کیمیاويReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| فولین-فینول | سنګون بایوټیک (شانګهای)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| L-tyrosine | سیګما | ۹۳۸۲۹ |
Reagent I:
سبسټریټ: 1٪ کیسین د غواګانو د شیدو محلول څخه: 1 ګرامه د غواګانو شیدو کیسین په 50 ملی لیتر کې د 0.1M سوډیم فاسفیت محلول pH 8.0 کې تحلیل کړئ ، د اوبو حمام کې د 65-70 درجې سانتي ګراد د 15 دقیقو لپاره تودوخه کړئ ، وخورئ او منحل کړئ ، د اوبو سره یخ کړئ ، په ترتیب سره سوډیم هایدروکسایډ تر pH 8.0 پورې، او په 100 ملی لیتر کې کم کړئ.
ریجنټ II:
د TCA محلول: 0.1M trichloroacetic acid، 0.2M sodium acetate او 0.3M acetic acid (وزن 1.64g trichloroacetic acid + 1.64g sodium acetate + 1.724mL acetic acid په پرله پسې ډول، 50mL deionized اوبه اضافه کړئ، د HC40 سره diionized اوبه اضافه کړئ، د HC40 سره تنظیم کړئ. 100ml).
III Reagent:
0.4m سوډیم کاربونیټ محلول (4.24 ګرامه انهایډروس سوډیم کاربونیټ وزن لري او په 100 ملی لیتر اوبو کې حل کیږي)
ریجنټ IV:
فولین فینول ریجنټ: 5 ځله د ډیونیز شوي اوبو سره ضعیف کړئ.
ریجنټ V:
انزایم کمول: 0.1 M سوډیم فاسفیت محلول، pH 8.0.
ریجنټ VI:
L-tyrosine معياري محلول: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine د 0.2M HCl سره منحل شوي.
کړنلاره
1. د UV-Vis spectrophotometer چالان کړئ او فوټومیټریک اندازه غوره کړئ.
2. د موج اوږدوالی د 660nm په توګه تنظیم کړئ.
3. د اوبو حمام چالان کړئ، د حرارت درجه 37 ℃ ته وټاکئ، ډاډ ترلاسه کړئ چې د 3-5 دقیقو لپاره د تودوخې بدلون نه وي.
4. د 0.5mL سبسټریټ په 2mL سینټرفیوج ټیوب کې د 37 ℃ د اوبو حمام کې د 10 دقیقو لپاره پری ګرم کړئ.
5. د 0.5 ملی لیتر کم شوی انزایم محلول د 10 دقیقو لپاره مخکې ګرم شوي سینټرفیوج ټیوب کې استخراج کړئ.د انزایم کمول د خالي ګروپ په توګه تنظیم کړئ.
6. د عکس العمل وروسته سمدلاسه 1.0 ملی لیتر TCA ریجنټ اضافه کړئ.ښه مخلوط کړئ او د 30 دقیقو لپاره د اوبو حمام کې وینځئ.
7. Centrifugate غبرګون محلول.
8. لاندې برخې په ټاکل شوي ترتیب کې اضافه کړئ.
| Reagent | حجم |
| سپرناټینټ | 0.5 ملی لیتر |
| 0.4M سوډیم کاربونیټ | 2.5 ملی لیتر |
| فولین فینول ریجنټ | 0.5 ملی لیتر |
9. مخکې له دې چې د 30 دقیقو لپاره د اوبو په حمام کې د 37 درجې تودوخې کې وخورئ ښه مخلوط کړئ.
10. OD۶۶۰د OD په توګه ټاکل شوی1;د کنټرول خالي ګروپ: د انزایم ډیلوینټ د انزایم محلول بدلولو لپاره کارول کیږي ترڅو د OD ټاکلو لپاره۶۶۰د OD په توګه2, ΔOD=OD1-OD2.
11. د L-tyrosine معیاري وکر: 0.5mL مختلف غلظت L-tyrosine محلول، 2.5mL 0.4M سوډیم کاربونیټ، 0.5mL فولین فینول په 5mL سینټرفیوج ټیوب کې، په 37℃ کې د 30mins لپاره انکیوبیټ، د OD لپاره کشف۶۶۰د L-tyrosine د مختلف غلظت لپاره، بیا معیاري وکر Y=kX+b ترلاسه کړ، چیرته چې Y د L-ټایروسین غلظت دی، X OD دی۶۰۰.
محاسبه
2: د عکس العمل ټول حجم (mL)
0.5: د انزایم محلول حجم (mL)
0.5: د تعامل مایع حجم چې په کروموجنیک تعیین کې کارول کیږي (mL)
10: د عکس العمل وخت (منټ)
Df: ګڼه ګوڼه کمول
Cد انزایم غلظت (mg/mL)
ارقام
انځور. 1 د DNA پاتې شنه
| نمونه | Ave C4 | نیوکلیک اسید بیا رغونه (pg/mg) | بیا رغونه (٪) | ټول نیوکلیک تیزاب ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | ۸۳٪ | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | — | — |
| STD1 | 12.955 |
— |
— |
— |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA وړیا H2O | بې بنسټه | — | — | — |
انځور 2 غوره pH
انځور 3 د تودوخې غوره درجه
انځور.4 pH ثبات
انځور 5 حرارتي ثبات
Fig.6 په 25℃ کې د ذخیره کولو ثبات
