د Rnase مخنیوی کونکی
Murine RNase inhibitor یو recombinant murine RNase inhibitor دی چې څرګند شوی او د E.coli څخه پاک شوی.دا د RNase A، B یا C سره په 1: 1 تناسب کې د غیر covalent bonding له لارې تړل کیږي، په دې توګه د دریو انزایمونو فعالیت منع کوي او RNA د تخریب څخه ساتي.په هرصورت، دا د Aspergillus څخه د RNase 1، RNase T1، S1 Nuclease، RNase H یا RNase په وړاندې اغیزمن ندي.د مورین RNase مخنیوی د RT-PCR، RT-qPCR او IVT mRNA لخوا ازمول شوی و، او د بیالبیلو سوداګریزو ریورس ټرانسکریپټیسس، DNA پولیمیریز او RNA پولیمیریز سره مطابقت درلود.
د انساني RNase مخنیوی کونکو په پرتله، د مورین RNase مخنیوی کونکي دوه سیستینونه نلري چې د اکسیډریشن سره خورا حساس دي چې د مخنیوی کونکي غیر فعال کیدو لامل کیږي.دا د DTT په ټیټ غلظت (له 1 mM څخه کم) کې باثباته کوي.دا ځانګړتیا دا د عکس العملونو لپاره د کارولو لپاره مناسبه کوي چیرې چې د DTT لوړ غلظت د عکس العمل لپاره منفي وي (د بیلګې په توګه د ریښتیني وخت RT-PCR).
Aغوښتنلیک
دا محصول په پراخه کچه په هره تجربه کې کارول کیدی شي چیرې چې د RNase مداخله ممکنه وي ترڅو د RNA تخریب مخه ونیسي، لکه:
1.د cDNA، RT-PCR، RT-qPCR، او داسې نورو د لومړۍ ستنې ترکیب.
2.د ویټرو لیږد / ژباړې پرمهال RNA د تخریب څخه ساتي (د مثال په توګه د ویټرو ویروس نقل سیسټم کې).
3.د RNA جلا کولو او پاکولو پرمهال د RNase فعالیت مخنیوی.
د ذخیره کولو شرایط
محصول په -25～-15 ℃ کې زیرمه کیدی شي ، د 2 کلونو لپاره اعتبار لري.
د ذخیره کولو بفر
50 mM KCl، 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃)، 8 mM DTT او 50% ګیلیسرول.
د واحد تعریف
د murine RNase inhibitor مقدار چې د 5ng د ribonuclease A د 50% فعالیت مخنیوی لپاره اړین دی د یو واحد (U) په توګه تعریف شوی.
د پروټین مالیکولر وزن
د Murine RNase inhibitor مالیکولر وزن 50 kDa دی.
د کیفیت کنټرول
Exonuclease فعالیت:
40 U د 1 μg λ -Hind III سره د DNA هضم کول په 37℃ کې د 16 ساعتونو لپاره هیڅ تخریب نه کوي لکه څنګه چې د agarose gel electrophoresis لخوا ټاکل کیږي.
د Endonuclease فعالیت:
40 U د 1μg λ DNA سره د 1μg λ DNA په 37℃ کې د 16 ساعتونو لپاره هیڅ تخریب نه رامینځته کوي لکه څنګه چې د agarose gel electrophoresis لخوا ټاکل کیږي.
نیکینګ فعالیت:
د 1μg pBR322 سره د 1μg pBR322 سره 40U د 16 ساعتونو لپاره په 37℃ کې د 16 ساعتونو لپاره هیڅ تخریب نه رامینځته کوي لکه څنګه چې د agarose gel electrophoresis لخوا ټاکل کیږي.
RNase فعالیت:
40U د مورین RNase مخنیوی کونکي د 1.6μg MS2 RNA سره د 4h لپاره په 37℃ کې هیڅ تخریب نه رامینځته کوي لکه څنګه چې د agarose gel electrophoresis لخوا ټاکل کیږي.
E.کولی DNA:
د Murine RNase inhibitor 40 U د E. coli genomic DNA د شتون لپاره د TaqMan qPCR په کارولو سره د E. coli 16S rRNA لوکس لپاره ځانګړي پریمر سره سکرین کیږي.د E. کولی جینومیک DNA ککړتیا ≤ 0.1 pg/40 U دی.
Nاوټs
1. تاوتریخوالی یا حرکت کول د انزایمونو غیر فعالیدو لامل کیږي.
2. د دې مخنیوی کونکي د تودوخې مطلوب حد 25-55 ℃ و، او دا په 65 ℃ او پورته کې غیر فعال و.
3. د RNase H، RNase 1 او RNase T1 فعالیتونه د مورین RNase مخنیوی کونکي لخوا منع شوي ندي.
4. د RNase فعالیت مخنیوی په پراخه پی ایچ کې وموندل شو (pH 5-9 ټول فعال وو)، او ترټولو لوړ فعالیت په pH 7-8 کې لیدل شوی.
5. څرنګه چې ریبونوکلیزونه په عمومي ډول د خرابیدو شرایطو کې فعالیت ساتي ، نو باید پاملرنه وشي چې د RNase Inhibitor مالیکولونو له مینځه وړلو څخه مخنیوی وشي کوم چې د ریبونیوکلیز سره پیچلي شوي دي.د فعال ریبونیوکلیز د خپریدو مخنیوي لپاره، د تودوخې درجه له 50 سانتي ګراد څخه زیاته او د یوریا یا نورو تخریب کونکو اجنټانو لوړ غلظت باید مخنیوی وشي.
