د موږک جینټایپینګ کټ

د بلی شمیره: HCR2021A

دا محصول یو کټ دی چې د موږک جینټایپ ګړندي پیژندنې لپاره ډیزاین شوی ، پشمول د DNA خام استخراج او PCR امپلیفیکیشن سیسټم.محصول د PCR پراخولو لپاره په مستقیم ډول د موږک له لکۍ ، غوږ ، پښې او نورو نسجونو څخه د لیسیس بفر او پروټیناز k لخوا د ساده تخریب وروسته کارول کیدی شي.د شپې هضم نه، د فینول-کلوروفارم استخراج یا د کالم پاکول، کوم چې ساده دي او د تجربو وخت لنډوي.محصول تر 2kb پورې د هدف ټوټو پراخولو لپاره مناسب دی او تر 3 جوړه پریمرونو سره ملټي پلیکس PCR عکس العملونه.د 2×د موږک نسج مستقیم PCR مکس په جینیکي ډول انجینر شوي DNA پولیمیریز لري، Mg²⁺, dNTPs او یو مطلوب بفر سیسټم چې د لوړ لوړولو موثریت او مخنیوی برداشت چمتو کوي، ترڅو د PCR عکس العملونه د ټیمپلیټ او پریمرونو په اضافه کولو سره ترسره شي او محصول 1× ته بیا هایډریټ شي.د دې محصول سره پراخ شوی د PCR محصول په 3′ پای کې یو مهم "A" اساس لري او د پاکولو وروسته د TA کلونینګ لپاره مستقیم کارول کیدی شي.

اجزا

د ذخیره کولو شرایط

محصولات باید د 2 کلونو لپاره -25~-15℃ کې زیرمه شي.د غوړولو وروسته، د لیسز بفر د لنډ مهاله ډیری کارونې لپاره په 2 ~ 8 ℃ کې زیرمه کیدی شي، او د کارولو په وخت کې ښه مخلوط شي.

غوښتنلیک

دا محصول د موږک ناک آوټ تحلیل ، ټرانسجینک کشف ، جینټایپینګ او داسې نورو لپاره مناسب دی.

برخی

1.ساده عملیات: د جینومیک DNA استخراج ته اړتیا نشته؛

2.پراخه غوښتنلیک: د مختلف موږک نسجونو مستقیم لوړولو لپاره مناسب.

لارښوونې

1.د جینومیک DNA خوشې کول

1) د lysate چمتو کول

د نسج lysate د موږک نمونو د شمیر سره سم چمتو کیږي چې د لیز کولو لپاره وي (د نسج lysate باید په ساحه کې د خوراک سره سم چمتو شي او د کارولو لپاره په بشپړه توګه مخلوط شي)، او د یو واحد نمونې لپاره د ریجنټونو تناسب په لاندې ډول دی:

2) د نمونې چمتو کول او لیسس

وړاندیز شوی نسج کارول

په پاکو سینټرفیوج ټیوبونو کې د موږک نسج نمونې په مناسبه اندازه واخلئ، په هر سینټرفیوج ټیوب کې 200μL تازه نسج لیسیټ اضافه کړئ، ورټیکس او شیک کړئ، بیا د 30 دقیقو لپاره په 55 ℃ کې کیږدئ، او بیا د 3 دقیقو لپاره په 98 ℃ کې تودوخه کړئ.

3) Centrifugation

لیسټیټ په ښه توګه وخورئ او د 5 دقیقو لپاره په 12,000 rpm کې سینټرفیوج کړئ.سپرناټینټ د PCR امپلیفیکیشن لپاره د نمونې په توګه کارول کیدی شي.که چیرې نمونه د ذخیره کولو لپاره اړین وي، سوپرناټینټ بل جراثیم سینټرفیوج ټیوب ته انتقال کړئ او د 2 اونیو لپاره په -20 ℃ کې ذخیره کړئ.

2.د PCR پراخول

د 2 × ماوس نسج مستقیم PCR مکس له -20 ℃ څخه لرې کړئ او په یخ کې وخورئ ، پورته مخلوط کړئ او د لاندې جدول مطابق د PCR عکس العمل سیسټم چمتو کړئ (په یخ باندې کار وکړئ):

یادونه:

a) اضافه شوي مقدار باید د سیسټم له 1/10 څخه ډیر نه وي، او که چیرې ډیر اضافه شي، د PCR پراخوالی مخنیوی کیدی شي.

د PCR وړاندیز شوي شرایط

یادونه:

الف) د انیل کولو تودوخه: د پریمر د Tm ارزښت ته په پام سره، دا سپارښتنه کیږي چې د انیل کولو تودوخه د پریمر کوچني Tm ارزښت ته وټاکئ +3~ 5℃.

ګډې ستونزې او حل لارې

1.هیڅ نښه شوي پټې نشته

1) ډیر lysis محصول.د نمونې خورا مناسب مقدار غوره کړئ، معمولا د سیسټم له 1/10 څخه زیات نه وي؛

2) ډیر لوی نمونه اندازه.lysate 10 ځله کم کړئ او بیا پراخ کړئ، یا د نمونې اندازه او بیا لیسز کم کړئ؛

3) د نسج نمونې تازه ندي.دا سپارښتنه کیږي چې د تازه نسج نمونې وکاروئ؛

4) د پرائمر ضعیف کیفیت.د پرائمر کیفیت تصدیق کولو او د پریمر ډیزاین مطلوب کولو لپاره د لوړولو لپاره جینومیک DNA وکاروئ.

2.غیر مشخص پراخوالی

1) د انیل کولو تودوخه خورا ټیټه ده او د دورې شمیره خورا لوړه ده.د انیل کولو تودوخې زیاتوالی او د دورې شمیر کم کړئ؛

2) د کينډۍ غلظت خورا لوړ دی.د ټیمپلیټ اندازه کم کړئ یا د امپلیفیکیشن وروسته 10 ځله ټیمپلیټ کم کړئ؛

3) د پرائمر ضعیف ځانګړتیا.د پریمر ډیزاین غوره کړئ.

یادښتونه

1.د نمونو تر مینځ د کراس ککړتیا څخه مخنیوي لپاره، د نمونې کولو ډیری وسیلې باید چمتو شي، او د وسیلو سطح د 2٪ سوډیم هایپوکلورایټ محلول یا نیوکلیک اسید کلینر سره د هرې نمونې وروسته پاکه شي که چیرې تکرار کارول اړین وي.

2.دا سپارښتنه کیږي چې د موږک تازه نسجونه وکاروئ، او د نمونې اخیستلو حجم باید ډیر لوی نه وي ترڅو د امپلیفیکیشن پایلو اغیزه ونه کړي.

3.د لیسز بفر باید د پرله پسې کنګل کیدو څخه مخنیوی وکړي، او د لنډ مهاله ډیری کارونې لپاره په 2~ 8℃ کې زیرمه کیدی شي.که چیرې په ټیټ تودوخې کې زیرمه شي، باران واقع کیدی شي، او باید د کارولو دمخه په بشپړه توګه منحل شي.

4.د PCR مکس باید د بار بار کنګل کیدو څخه مخنیوی وشي، او د لنډ مهاله تکرار کارولو لپاره په 4℃ کې زیرمه کیدی شي.

5.دا محصول یوازې د ساینسي تجربوي څیړنې لپاره دی او باید په کلینیکي تشخیص یا درملنې کې ونه کارول شي.