UDG/UNG انزایمونه
UDG (uracil DNA glycosylase) کولی شي په ssDNA او dsDNA کې د uracil بیس او د شکر فاسفیټ بیکبون ترمنځ د N-glycosidic لینک هایدرولیسس کټالیز کړي.دا کولی شي په اسانۍ سره د ایروسول ککړتیا کنټرول کړي او د عام مالیکول بیولوژی سیسټمونو لکه PCR، qPCR، RT-qPCR او LAMP لپاره مناسب دی.
مشخصات
| د بیان کوربه | Recombinant E. coliwith uracil DNA glycosylase جین |
| مالیکولر وزن | 24. 8kDa |
| پاکوالی | ≥95% (SDS-PAGE) |
| د حرارت غیر فعال کول | 95℃، 5~10 دقیقې |
| د واحد تعریف | یو واحد (U) د انزایم مقدار په توګه تعریف شوی چې په 25 ℃ کې په 30 دقیقو کې د l μg dU لرونکي dsDNA هایدرولیسس کټالیز کولو لپاره اړین دی. |
ذخیره کول
محصول باید د دوه کلونو لپاره په -25ºC~-15°C کې زیرمه شي.
لارښوونې
1.د لاندې سیسټم سره سم د PCR عکس العمل مخلوط چمتو کول
| اجزا | حجم (μL) | وروستی تمرکز |
| 10×PCR بفر (Mg²+ Plus) | 5 | ۱× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol/Leach |
| کينډۍ DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| پریمر 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Taq DNA پولیمریز (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)، 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | تر 50 پورې | - |
یادونه: د تجربوي اړتیاو له مخې، د dUTP وروستی غلظت د 0.2-0.6 mmol/L ترمنځ تنظیم کیدی شي، او 0.2 mmol/L dTTP په انتخابي ډول اضافه کیدی شي.
2.د پراخولو پروسه
| د سایکل ګام | دحرارت درجه | وخت | سایکلونه |
| dU لرونکی ټیمپلیټ تخریب | 25℃ | 10 دقیقې | 1 |
| د UDG فعالول، د ټیمپلیټ ابتدايي نیمګړتیا | 95℃ | 5 ~ 10 دقیقې | 1 |
| له منځه وړل | 95℃ | 10 ثانیې |
30-35 |
| annealing | 60℃ | 20 ثانیې | |
| تمدید | 72℃ | 30sec/kb | |
| وروستی تمدید | 72℃ | 5 دقیقې | 1 |
یادونه: د عکس العمل وخت په 25 ° C کې د تجربوي اړتیاو سره سم د 5-10 دقیقو دننه تنظیم کیدی شي.
یادښتونه
1.UDG په ډیری PCR عکس العمل بفرونو کې فعال دی.
2.انزایمونه باید په یخ بکس یا د یخ حمام کې زیرمه شي کله چې کارول کیږي ، او د کارولو وروسته سمدلاسه باید په -20 ° C کې زیرمه شي.
3.مهرباني وکړئ اړین PPE واغوندئ، لکه لابراتوار کوټ او دستکشې، ستاسو روغتیا او خوندیتوب ډاډمن کړئ!
