Robustart Taq DNA Polymerase
Robustart Taq DNA پولیمریز یو ګرم پیل DNA پولیمیریز دی.دا محصول نه یوازې د غیر مشخص عکس العمل مخه نیسي چې د PCR سیسټم چمتو کولو او پراخولو په پروسه کې د پریمرونو غیر مشخص انیل کولو یا پریمر راټولولو له امله رامینځته کیږي.له همدې امله، دا غوره ځانګړتیا لري او د ټیټ غلظت ټیمپلیټونو د پراخولو لپاره خورا اغیزمن دی، او دا د څو پلیکس PCR امپلیفیکیشن غبرګون لپاره مناسب دی.سربیره پردې ، دا محصول خورا ښه پلي کیدو وړتیا لري ، او د پی سی آر عکس العملونو مختلف ډولونو کې د ثبات لوړولو پایلې ترلاسه کیدی شي.
اجزا
1.5 U/μL Robustart Taq DNA پولیمریز
2.10 × PCR بفر II (Mg²+ وړیا) (اختیاري)
3.25 mM MgCl2(اختیاری)
* 10 × PCR بفر II (Mg²+ وړیا) dNTP او Mg²+ نلري، مهرباني وکړئ dNTPs او MgCl اضافه کړئ2کله چې د غبرګون سیسټم چمتو کول.
وړاندیز شوي غوښتنلیکونه
1.ګړندی وده.
2.څو اړخیزه وده.
3.د وینې، سویبونو او نورو نمونو مستقیم پراخول.
4.د تنفسي ناروغیو کشف.
د ذخیره کولو حالت
-20 ° C د اوږدې مودې ذخیره کولو لپاره، باید د کارولو دمخه ښه مخلوط شي، د بار بار کنګل کیدو څخه مخنیوی وشي.
*که باران د یخچال څخه وروسته واقع شي، دا عادي خبره ده؛دا سپارښتنه کیږي چې د مخلوط کولو او کارولو دمخه د خونې د حرارت درجه انډول کړئ.
د واحد تعریف
یو فعال واحد (U) د انزایم مقدار په توګه تعریف شوی چې 10 nmol deoxyribonucleotide په 74°C کې د 30 دقیقو لپاره په تیزاب کې نه حل کیدونکي مواد کې د فعال سالمون سپرم DNA د ټیمپلیټ/پرائمر په توګه کاروي.
د کیفیت کنټرول
1.د SDS-PAGE الکتروفوریټیک پاکوالی له 98٪ څخه ډیر.
2.د امپلیفیکیشن حساسیت، د بیچ څخه تر بیچ کنټرول، ثبات.
3.نه خارجي نیوکلیز فعالیت، نه خارجي انډونیوکلیز یا د خارجي نیوکلیز ککړتیا
لارښوونې
د عکس العمل تنظیم کول
| اجزا | حجم(μL) | وروستی تمرکز |
| 10 × PCR بفر II (Mg²+ وړیا)a | 5 | ۱× |
| dNTPs (10mm هر dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
| 25 × پریمر مخلوطب | 2 | ۱× |
| کينډۍ | - | ＜ 1 μg/ عکس العمل |
| ddH2O | تر 50 پورې | - |
یادونه:
1) یو.بفر dNTP او Mg²+ نلري، مهرباني وکړئ dNTPs او MgCl اضافه کړئ2کله چې د غبرګون سیسټم چمتو کول.
2) ب.که چیرې د qPCR/qRT-PCR لپاره کارول کیږي، فلوروسینټ تحقیقات باید د غبرګون سیسټم ته اضافه شي.عموما، د 0.2 μM وروستی پریمر غلظت به ښه پایلې ورکړي؛که د عکس العمل فعالیت ضعیف وي ، د پریمر غلظت د 0.2-1 μM په حد کې تنظیم کیدی شي.د تحقیقاتو غلظت معمولا د 0.1-0.3 μM په حد کې غوره کیږي.د غلظت تدریجي تجربې د پریمر او تحقیقاتو غوره ترکیب موندلو لپاره ترسره کیدی شي.
د حرارتي سایکل چلولو پروتوکول
| منظم PCRپروسه | |||
| ګام | دحرارت درجه | وخت | سایکلونه |
| مخکې له ځنډه | 95℃ | 1-5 دقیقې | 1 |
| له منځه وړل | 95℃ | 10-20 ثانیې | 40-50 |
| annealing / توسیع | 56-64℃ | 20-60 ثانیې | |
| چټک PCRپروسه | |||
| ګام | دحرارت درجه | وخت | سایکلونه |
| مخکې له ځنډه | 95℃ | 30 ثانیې | 1 |
| له منځه وړل | 95℃ | 1-5 ثانیې | 40-45 |
| annealing / توسیع | 56-64℃ | 5-20 ثانیې | |
یادښتونه
1.د چټک DNA پولیمیریز د لوړولو کچه باید له 1 kb/10 s څخه کم نه وي.د تودوخې د لوړیدو او راټیټیدو کچه ، د تودوخې کنټرول حالت او د مختلف PCR وسیلو د تودوخې لیږد موثریت خورا ډیر توپیر لري ، نو دا سپارښتنه کیږي چې د ځانګړي ګړندي PCR وسیلې لپاره د غوره عکس العمل شرایط غوره کړي.
2.سیسټم خورا د تطبیق وړ دی، د لوړ ځانګړتیا او حساسیت سره.
3.د لوړ حساسیت PCR کشف ریجنټونو په توګه د کارولو لپاره مناسب، او په ملټي پلیکس PCR امپلیفیکیشن عکس العملونو کې کارول کیدی شي.
4.5′→3′ پولیمریز فعالیت، 5′→3′ exonuclease فعالیت؛نه 3′→ 5′ exonuclease فعالیت؛د ثبوت لوستلو فعالیت نشته.
5.د PCR او RT-PCR د کیفیت او کمي ازموینې لپاره مناسب.
6.د PCR محصول 3′ پای A دی، کوم چې په مستقیم ډول په T ویکتور کې کلون کیدی شي.
7.درې مرحلې طریقه د پرائمرونو لپاره چې د ټیټ انیل کولو تودوخې سره یا د 200 bp څخه اوږده ټوټه پراخه کولو لپاره وړاندیز کیږي.
