PNGase F
Peptide-N-Glycosidase F(PNGase F) د ګلیکوپروټینونو څخه نږدې ټول N-تړل شوي اولیګوساکرایډونو لرې کولو لپاره ترټولو مؤثره انزایمیک میتود دی.PNGase F یو امیډیس دی، کوم چې د داخلي ډیری GlcNAc او asparagine پاتې شونو تر منځ د لوړ مانینوز، هایبرډ، او پیچلي oligosaccharides له N-linked glycoproteins څخه جلا کیږي.
غوښتنلیک
دا انزایم د پروټینونو څخه د کاربوهایډریټ پاتې شونو لرې کولو لپاره ګټور دی.
چمتووالی او مشخصات
| بڼه | بې رنګه مایع |
| د پروټین پاکوالی | ≥95% (د SDS-PAGE څخه) |
| فعالیت | ≥500,000 U/mL |
| Exoglycosidase | هیڅ فعالیت ونه موندل شو (ND) |
| Endoglycosidase F1 | ND |
| Endoglycosidase F2 | ND |
| Endoglycosidase F3 | ND |
| Endoglycosidase H | ND |
| پروټیز | ND |
ملکیتونه
| د EC شمیره | 3.5.1.52(د مایکرو ارګانیزم څخه بیا ترکیب) |
| مالیکولر وزن | 35 kDa (SDS-PAGE) |
| isoelectric point | 8. 14 |
| غوره pH | 7.0-8.0 |
| غوره تودوخه | ۶۵ سانتي ګراد |
| د سبسټریټ ځانګړتیا | د GlcNAc او asparagine پاتې شونو ترمنځ د ګلایکوسیډیک بانډونو پاکول انځور. 1 |
| د پیژندنې سایټونه | N سره تړلي ګلایکان پرته لدې چې α1-3 فیکوز ولري انځور 2 |
| فعالونکي | DTT |
| مخنیوی کوونکی | SDS |
| د ذخیره کولو حرارت | -25 ~-15 ℃ |
| د حرارت غیر فعال کول | د 20µL عکس العمل مخلوط چې 1µL PNGase F لري د 10 دقیقو لپاره په 75 ° C کې د انکیوبیشن لخوا غیر فعال کیږي. |
شکل 1 د PNGase F د سبسټریټ ځانګړتیا
انځور 2 د PNGase F پیژندنه.
کله چې د GlcNAc داخلي پاتې شونه د α1-3 فیوکوز سره وصل وي، PNGase F نشي کولی د ګلیکوپروټینونو څخه N-linked oligosaccharides پاک کړي.دا تعدیل په نباتاتو او ځینو حشراتو ګلیکوپروټینونو کې عام دی.
Cاجزا
|
| اجزا | تمرکز |
| 1 | PNGase F | 50 µl |
| 2 | 10×Glycoprotein denaturing buffer | 1000 μl |
| 3 | 10×GlycoBuffer 2 | 1000 μl |
| 4 | 10٪ NP-40 | 1000 μl |
د واحد تعریف
یو واحد (U) د انزایم مقدار په توګه تعریف شوی چې د کاربوهایډریټ 95٪ څخه د 10 µg منحل شوي RNase B څخه په 1 ساعت کې په 37 ° C کې د 10 µL ټول عکس العمل حجم کې لرې کولو لپاره اړین دی.
د غبرګون شرایط
1. 1-20 µg ګلایکوپروټین د ډیونیز شوي اوبو سره منحل کړئ، 1 µl 10×Glycoprotein Denaturing Buffer او H2O (که اړتیا وي) اضافه کړئ ترڅو د 10 µl ټول عکس العمل حجم رامینځته کړي.
2.په 100 ° C کې د 10 دقیقو لپاره سینه واچوئ، په یخ کې یې یخ کړئ.
3.2 µl 10×GlycoBuffer 2، 2 µl 10% NP-40 اضافه کړئ او مخلوط کړئ.
4.1-2 μl PNGase F او H اضافه کړئ2O (که اړتیا وي) د 20 µl ټول غبرګون حجم او مخلوط کړئ.
5.عکس العمل د 60 دقیقو لپاره په 37 درجې سانتي ګراد کې وخورئ.
6.د SDS-PAGE تحلیل یا HPLC تحلیل لپاره.
