mRNA Cap2'O-Methyltransferase

mRNA Cap 2´-O-methyltransferase د بیا جوړونکي E. coli فشار څخه اخیستل شوی چې د mRNA Cap 2 ´-O-Methyltransferase واکسین لپاره جین لیږدوي.دا انزایم د RNA په 5' پای کې د کیپ جوړښت سره نږدې د لومړي نیوکلیوټایډ په 2´-O موقعیت کې میتیل ګروپ اضافه کوي. دا انزایم د S-adenosylmethionine (SAM) څخه د میتیل ډونر په توګه د میتیل ډونر په توګه کارول کیږي د میتیل پوښ شوي RNA (کیپ). -0) د کیپ - 1 جوړښت په پایله کې.

د Cap1 جوړښت کولی شي د ژباړې موثریت زیات کړي، د لیږد او مایکرو انجیکشن تجربو کې د mRNA بیان ته وده ورکړي. دا انزایم په ځانګړي ډول RNA ته د m7GpppN کیپ سره د سبسټریټ په توګه اړتیا لري.دا نشي کولی د 5 په پای کې د pN، ppN، pppN یا GpppN سره RNA وکاروي.کیپ شوی RNA کیدای شي د کیپ انلاګ په کارولو سره د ویټرو لیږد له لارې یا د ویکسینیا کیپینګ انزایم په کارولو سره د انزایمیک کیپینګ له لارې چمتو شي.

اجزا

mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50U/μL)

10 × کیپینګ عکس العمل بفر

ذخیره کول

-25 ～ - 15 ℃ د ذخیره کولو لپاره

د ذخیره کولو بفر

20 mM Tris-HCl（pH 8.0，25℃)، 100mm NaCl، 1mm DTT، 0. 1mm EDTA، 0. 1% Triton X- 100, 50% ګیلیسرول.

د واحد تعریف

یو واحد د انزایم مقدار په توګه تعریف شوی چې په 37 درجې سانتي ګراد کې په 1 ساعت کې د 80 nt پوښ شوي RNA لیږد 10 pmoles methylate لپاره اړین دی.

د کیفیت کنټرول ارزونه

Exonuclease:50U د mRNA Cap 2 ´ -O-Methyltransferase د 1μg λ-Hind III سره DNA د 16 ساعتونو لپاره په 37 ℃ کې د 16 ساعتونو لپاره هیڅ تخریب نه رامینځته کوي لکه څنګه چې د agarose gel electrophoresis لخوا ټاکل کیږي.

Endonuclease: 50 U د mRNA Cap 2 ´ -O-Methyltransferase د 1 μg λDNA سره په 37℃ کې د 16 ساعتونو لپاره هیڅ تخریب نه رامینځته کوي لکه څنګه چې د اګاروز جیل الیکٹروفورسیس لخوا ټاکل کیږي.

نیکیس: 50U د mRNA Cap 2 ´ -O-Methyltransferase د 1μg pBR322 سره په 37 ℃ کې د 16 ساعتونو لپاره هیڅ تخریب نه رامینځته کوي لکه څنګه چې د agarose gel electrophoresis لخوا ټاکل کیږي.

RNase: 50U د mRNA Cap 2 ´ -O-Methyltransferase د 1.6μg MS2 RNA سره د 4 ساعتونو لپاره په 37℃ کې هیڅ تخریب نه رامینځته کوي لکه څنګه چې د اګاروز جیل الیکٹروفورسیس لخوا ټاکل کیږي.

E. کولی DNA: 50U mRNA Cap 2 ´ -O-Methyltransferase د شتون لپاره سکرین شوی.E. کولی جینومیک DNA د TaqMan qPCR په کارولو سره د ځانګړي پریمرونو سرهE. کولی 16S rRNA لوکس.دE. کولی جینومیک DNA ککړتیا = 1 دهE. کولی جینوم

باکتریا Endotoxin: LAL-ازموینه، د چینایي فارماکوپیا IV 2020 نسخې مطابق، د جیل محدودیت ازموینې میتود، عمومي قاعده (1143).د باکتریا انډوټوکسین مواد باید = 10 EU/mg وي.

د غبرګون سیسټم او شرایط

1. په 1.5 ملی لیتر مایکروفیج ټیوب کې د 16.0 µL وروستی حجم ته مناسب مقدار کیپ شوي RNA او RNase-free H2O سره یوځای کړئ.

2. د 5 دقیقو لپاره په 65 ℃ کې تودوخه کړئ او وروسته د 5 دقیقو لپاره د یخ حمام وکړئ.

3. لاندې برخې په ټاکل شوي ترتیب کې اضافه کړئ (د کیپ شوي RNA میتیلیشن لپاره

له 10 څخه کم

*10× د کیپینګ عکس العمل بفر: 500 mm Tris-HCl(pH 8.0, 25℃)، 50 mm KCl، 10 mm MgCl2 、 10 mm DTT.

4. د 1 ساعت لپاره په 37 ℃ کې انکیوبیشن کړئ (د 200 nt څخه کم هدف ټوټې لپاره د 2 ساعتونو انکیوبیشن سپارښتنه کیږي).

غوښتنلیکونه

د مایکرو انجیکشن او لیږد تجربو په جریان کې د mRNA بیان ښه کولو لپاره.

د کارولو په اړه یادښتونه

1. د عکس العمل څخه مخکې، RNA باید پاک شي او په نیوکلیز پاکو اوبو کې منحل شي، ټول محلولونه باید هیڅ EDTA او ions نلري.

2. سپارښتنه کیږي چې د نمونې RNA په 65 ℃ کې د 5 دقیقو لپاره د عکس العمل دمخه تودوخه کړئ ترڅو د لیږد په 5' پای کې ثانوي جوړښت لرې کړي.دا د پیچلي 5 ´ ترمینل جوړښت لپاره تر 10 دقیقو پورې غځول کیدی شي.