DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) یو endodeoxyribonuclease دی چې کولی شي د واحد یا دوه اړخیز DNA هضم کړي.دا د فاسفوډیسټر بانډونه پیژني او ماتوي ترڅو monodeoxynucleotides یا واحد- یا دوه اړخیز oligodeoxynucleotides د فاسفیت ګروپونو سره په 5′-ټرمینل کې او هایدروکسیل په 3′-ټرمینل کې تولید کړي.د DNase I فعالیت په Ca2+ پورې اړه لري او د دوه اړخیز فلزي ایونونو لکه Mn2+ او Zn2+ لخوا فعال کیدی شي.5mM Ca2+ انزایم د هایدرولیسس څخه ساتي.د Mg2+ په شتون کې، انزایم کولی شي په تصادفي ډول د DNA په هره برخه کې هر سایټ پیژني او پاک کړي.د Mn2+ په شتون کې، د DNA دوه ګوني ډنډونه په ورته وخت کې پیژندل کیدی شي او تقریبا په ورته سایټ کې ټوټه ټوټه شي ترڅو د فلیټ پای DNA ټوټې یا د 1-2 نیوکلیوټایډونو سره د چپکونکي پای DNA ټوټې رامینځته کړي.
د محصول ملکیت
د بوواین پانقراس DNase I د خمیر څرګندولو سیسټم کې څرګند شوی او پاک شوی.
Cاجزا
| اجزا | حجم | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I، RNase وړیا | 20μL | 200μL | 1 ملی لیتر | 10 ملی لیتر |
| 10×DNase I بفر | 1 ملی لیتر | 1 ملی لیتر | 5 × 1 ملی لیتر | 5 × 10 ملی لیتر |
ترانسپورت او ذخیره کول
1. د ذخیره کولو ثبات: – د ذخیره کولو لپاره 15℃~-25℃؛
2. د ترانسپورت ثبات: د یخ کڅوړو لاندې ټرانسپورټ؛
3. په کې عرضه شوی: 10 mM Tris-HCl، 2 mM CaCl250% ګیلیسرول، pH 7.6 په 25℃ کې.
د واحد تعریف
یو واحد د انزایم مقدار په توګه تعریف شوی کوم چې به په 10 دقیقو کې د 37 درجې سانتي ګراد کې 1 µg pBR322 DNA په بشپړ ډول تخریب کړي.
د کیفیت کنټرول
RNase:د DNase I 5U د 1.6 μg MS2 RNA سره د 4 ساعتونو لپاره په 37 ℃ کې هیڅ تخریب نه کوي لکه څنګه چې د agarose gel electrophoresis لخوا ټاکل کیږي.
باکتریا Endotoxin:LAL-ټیسټ، د چینايي فارماکوپیا IV 2020 نسخه، جیل محدودیت ازموینې میتود، عمومي اصول (1143).د باکتریا انډوټوکسین مینځپانګه باید ≤10 EU/mg وي.
د کارولو لپاره لارښوونې
1. په RNase-free ټیوب کې د عکس العمل حل د لاندې لیست شوي تناسب سره سم چمتو کړئ:
| اجزا | حجم |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I بفر | 1 μL |
| DNase I، RNase وړیا (5U/μL) | 1 U په هر μg RNA |
| ddH2O | تر 10 μL پورې |
د 15 دقیقو لپاره 2.37 ℃؛
3. د عکس العمل د بندولو لپاره د ختمولو بفر اضافه کړئ، او د DNase I غیر فعالولو لپاره د 10 دقیقو لپاره په 65℃ تودوخه کړئ. نمونه په مستقیم ډول د راتلونکي لیږد تجربې لپاره کارول کیدی شي.
یادښتونه
1. په هر μg RNA کې 1U DNase I، یا 1U DNase I د 1μg څخه کم RNA لپاره وکاروئ.
2.EDTA باید د 5 mM په وروستي غلظت کې اضافه شي ترڅو RNA د انزایمونو د غیر فعال کیدو پرمهال له تخریب څخه وژغورل شي.
