د CHO HCP ELISA کټ
په دې ارزونه کې د یو ګام امیونوسوربینټ ELISA میتود کارول کیږي.هغه نمونې چې CHOK1 HCP لري په ورته وخت کې د HRP لیبل شوي وزې ضد CHOK1 انټي باډي او د CHOK1 ضد انټي باډي سره عکس العمل ښیې چې په ELISA پلیټ کې پوښل شوي ، په پای کې د سالډ مرحله انټي باډي - HCP لیبل شوي انټي باډي سینڈوچ کمپلیکس رامینځته کوي.غیر پابند انټيجن انټي باډي د ELISA پلیټ مینځلو سره لرې کیدی شي.د TMB سبسټریټ د کافي عکس العمل لپاره څاه ته اضافه کیږي.د سټاپ محلول اضافه کولو وروسته د رنګ وده ودرول کیږي ، او د عکس العمل محلول OD یا جذب ارزښت په 450/650nm کې د مایکروپلیټ ریډر سره لوستل کیږي.د OD ارزښت یا د جذب ارزښت په حل کې د HCP مینځپانګې سره متناسب دی.له دې څخه، په محلول کې د HCP غلظت د معیاري وکر سره سم محاسبه کیدی شي.
غوښتنلیک
دا کټ په نمونو کې د CHOK1 کوربه حجرو پروټین پاتې شونو مینځپانګې په مقداري ډول کشف کولو لپاره کارول کیږي.
Cاجزا
| S/N | اجزا | تمرکز | د ذخیره کولو شرایط |
| 1 | CHOK1 HCP معیاري | 0.5mg/mL | ≤-20℃ |
| 2 | د CHO ضد HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤-20℃، د رڼا څخه ساتنه وکړئ |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃، د رڼا څخه ساتنه وکړئ |
| 4 | 20 × PBST 0.05٪ | NA | 2-8℃ |
| 5 | د حل مخه ونیسئ | NA | RT |
| 6 | د مایکروپلیټ سیلونکي | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | د لوړ جذب دمخه کوټینګ پلیټونه | NA | 2-8℃ |
تجهیزات اړین دي
| مصرفي توکي / وسایل | تولید | کتلاګ |
| د مایکروپلیټ لوستونکی | مالیکولر وسایل | Spectra Max M5، M5e، یا مساوي |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355، یا مساوي |
| ورټیکس مکسر | IKA | MS3 ډیجیټل، یا مساوي |
ذخیره او ثبات
1.ترانسپورت په -25~-15°C.
2.د ذخیره کولو شرایط لکه څنګه چې په جدول 1 کې ښودل شوي؛اجزا 1-2 زیرمه شوي ≤–20 °C، 5-6 زیرمه شوي RT، 3 、4، 7، 8 په 2-8 ℃ کې زیرمه شوي؛د اعتبار موده 12 میاشتې ده.
د محصول پیرامیټونه
1.حساسیت: 1ng/mL
2.د کشف حد: 3- 100ng/mL
3.دقیقیت: د انټراساس CV≤ 10٪، د انټراساس CV≤ 15٪
4.د HCP پوښښ:> 80٪
5.ځانګړتیا: دا کټ نړیوال دی ځکه چې دا په ځانګړي ډول د پاکولو پروسې څخه خپلواک CHOK1 HCP سره عکس العمل ښیې.
د ریجنټ چمتو کول
1.PBST 0.05%
د 15 ملی لیتر 20 × PBST 0.05٪ واخلئ، په ddH کې منحل شوي2O، او تر 300 ملی لیتره پورې جوړ شوی.
2.1.0٪ BSA
له بوتل څخه 1 ګرامه BSA واخلئ او په 100 ملی لیتر PBST 0.05٪ کې یې حل کړئ، ښه مخلوط کړئ تر هغه چې په بشپړه توګه منحل شي، او په 2-8 درجو کې ذخیره کړئ.د تیار شوي کمولو بفر د 7 ورځو لپاره اعتبار لري.دا سپارښتنه کیږي چې د اړتیا سره سم چمتو کړئ.
3.د کشف حل 2μg/mL
48μL 0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP واخلئ او د 1% BSA په 11,952μL کې ضعیف کړئ ترڅو د 2μg/mL د کشف محلول وروستی غلظت ترلاسه کړئ.
4.QC او د CHOK1 HCP معیارونو چمتو کول
| ټیوب نه. | اصلي | تمرکز | حجم | 1% BSA | ټول حجم | وروستی |
| A | معیاري | 0.5mg/mL | 10 | 490 | ۵۰۰ | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | ۴۵۰ | ۵۰۰ | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | ۴۵۰ | ۵۰۰ | 100 |
| S2 | S1 | 100 | ۳۰۰ | 100 | ۴۰۰ | 75 |
| S3 | S2 | 75 | ۲۰۰ | ۱۷۵ | ۳۷۵ | 40 |
| S4 | S3 | 40 | ۱۵۰ | ۳۵۰ | ۵۰۰ | 12 |
| S5 | S4 | 12 | ۲۰۰ | ۲۰۰ | ۴۰۰ | 6 |
| S6 | S5 | 6 | ۲۰۰ | ۲۰۰ | ۴۰۰ | 3 |
| NC | NA | NA | NA | ۲۰۰ | ۲۰۰ | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | ۲۰۰ | ۲۵۰ | 20 |
جدول: د QC او معیارونو چمتو کول
د ارزونې کړنلاره
1.لکه څنګه چې پورته "ریجنټ چمتووالی" کې ښودل شوي ریجنټونه چمتو کړئ.
2.په هر څاه کې 50μL معیارونه، نمونې او QCs (جدول 3 ته مراجعه وکړئ) واخلئ، بیا د کشف محلول 100μL (2μg/mL) اضافه کړئ؛پلیټ د سیلر سره پوښ کړئ، او د ELISA پلیټ په ترمامیکسر کې ځای په ځای کړئ.په 500rpm، 25±3℃ کې د 2 ساعتونو لپاره سینګار کړئ.
3.مایکروپلیټ په سینک کې واړوئ او د کوټینګ محلول پریږدئ.په هر څاه کې د PBST 0.05% 300μL پایپټ د ELISA پلیټ مینځل او محلول پریږدئ او مینځل 3 ځله تکرار کړئ.پلیټ په پاک کاغذ تولیه کې واړوئ او وچ یې کړئ.
4.هر څاه ته د TMB سبسټریټ 100μL (جدول 1 وګورئ) اضافه کړئ، د ELISA پلیټ مهر کړئ، او په تیاره کې د 15 دقیقو لپاره په 25 ± 3 ℃ کې سینګار کړئ.
5.په هر څاه کې 100μL د سټاپ محلول پایپټ کړئ.
6.د مایکروپلیټ ریډر سره د 450/650nm طول موج کې جذب اندازه کړئ.
7.د سافټ میکس یا مساوي سافټویر لخوا ډاټا تحلیل کړئ.د څلور پیرامیټر لوژیستیکي ریګریشن ماډل په کارولو سره معیاري وکر پلاټ کړئ.
د معیاري منحني مثال
نوټ: که چیرې په نمونه کې د HCP غلظت د معیاري منحني پورتنۍ حد څخه ډیر وي، دا باید د ازموینې دمخه د ډیلیشن بفر سره په سمه توګه منحل شي.
یادښتونه
د سټاپ محلول 2M سلفوریک اسید دی ، مهرباني وکړئ په احتیاط سره اداره کړئ ترڅو د ویشلو مخه ونیسئ!
