Bst 2.0 DNA پولیمیریز (د ګلیسرول وړیا)
Bst DNA پولیمیریز V2 د Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I څخه اخیستل شوی، کوم چې 5′→ 3′ DNA پولیمیریز فعالیت او د قوي زنځیر بدلولو فعالیت لري، مګر 5′→ 3′ exonuclease فعالیت نلري.Bst DNA Polymerase V2 د سټرنډ بې ځایه کیدو لپاره په مناسبه توګه مناسب دی، isothermal amplification LAMP (Loop mediated isothermal amplification) او چټک ترتیب.
اجزا
| اجزا | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (د ګلیسرول څخه پاک) (8U/μL) | 0.2 ملی لیتر | 1 ملی لیتر | 10 ملی لیتر |
| 10×HC Bst V2 بفر | 1.5 ملی لیتر | 2×1.5 ملی لیتر | 3 × 10 ملی لیتر |
| MgSO4(100mm) | 1.5 ملی لیتر | 2×1.5 ملی لیتر | 2 × 10 ملی لیتر |
غوښتنلیکونه
1. LAMP isothermal amplification
2. د DNA strand واحد بې ځایه کیدنه
3. د لوړ GC جین ترتیب کول
4. د نانوګرام کچې DNA ترتیب کول.
د ذخیره کولو حالت
تر 0°C لاندې ترانسپورت او په -25°C~-15°C کې زیرمه شي.
د واحد تعریف
یو واحد د انزایمونو مقدار په توګه تعریف شوی چې د 25 nmol dNTP په 30 دقیقو کې په 65 درجې سانتي ګراد کې په تیزاب کې نه منحل کېدونکي موادو کې شاملوي.
د کیفیت کنټرول
1.د پروټین پاکوالي ارزونه (SDS-PAGE):د Bst DNA پولیمریز V2 پاکوالی ≥99٪ د SDS-PAGE تحلیل لخوا د Coomassie Blue کشف په کارولو سره ټاکل کیږي.
2.Exonuclease فعالیت:د 50 μL تعامل چې لږترلږه 8 U Bst DNA پولیمیریز V2 لري د 1 μg λ -Hind Ⅲ د 16 ساعتونو لپاره په 37 ℃ کې د DNA هضم کوي پایله یې د تشخیص وړ تخریب نه کیږي.
3.د نیکیس فعالیت:د 50 μL تعامل چې لږترلږه 8 U Bst DNA پولیمیریز V2 لري د 1 μg pBR322 DNA سره د 16 ساعتونو لپاره په 37 درجې سانتي ګراد کې د 16 ساعتونو لپاره د 37 درجې C سره چې ټاکل شوي د کشف وړ تخریب پایله نلري.
4.د RNase فعالیت:د 50 μL تعامل چې لږترلږه 8 U Bst DNA پولیمیریز V2 لري د 1.6 μg MS2 RNA سره د 16 ساعتونو لپاره په 37 درجې سانتي ګراد کې د 16 ساعتونو لپاره د 37 درجې سانتي ګراد په پایله کې د تشخیص وړ تخریب پایله نلري.
5.ای کولی DNA:د Bst DNA پولیمیریز V2 120 U د E. coli جینومیک DNA د شتون لپاره د TaqMan qPCR په کارولو سره د E. coli 16S rRNA لوکس لپاره ځانګړي پریمر سره سکرین شوی.د E. کولی جینومیک DNA ککړتیا ≤1 کاپي ده.
د LAMP غبرګون
| اجزا | ۲۵μL |
| 10×HC Bst V2 بفر | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mm) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM هر یو) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 شنه (25×)a | 1.0 μL |
| د پریمر مخلوطb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (د ګلیسیرول څخه پاک) (8 U/uL) | 1 μL |
| کينډۍ | × μL |
| ddH₂O | تر 25 μL پورې |
یادونه:
1) یو.SYTOTM 16 شنه (25×): د تجربوي اړتیاو سره سم، نور رنګونه د بدیل په توګه کارول کیدی شي؛
2) ب.پرائمر مخلوط: د 20 µ M FIP، 20 µ M BIP، 2.5 µ M F3، 2.5 µ M B3، 5 µ M LF، 5 µ M LB او نورو حجمونو مخلوط کولو سره ترلاسه شوی.
عکس العمل او حالت
1 × HC Bst V2 بفر، د انکیوبیشن تودوخه د 60 ° C او 65 ° C ترمنځ ده.
د حرارت غیر فعال کول
80 °C، 20 دقیقې
