BspQI
BspQI بیا په E. کولی کې څرګند کیدی شي چې ځانګړي سایټونه پیژني او د لاندې تولید شوي.
BspQI، د IIs محدودیت endonuclease محدودیت endonuclease، د بیا جوړونکي E. coli فشار څخه اخیستل شوی چې د Bacillus sphaericus څخه کلون شوی او ترمیم شوی BspQI جنین لیږدوي.دا کولی شي ځانګړي سایټونه وپیژني، او د پیژندلو ترتیب او د پاکولو سایټونه په لاندې ډول دي:
5' · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
د تولیداتو ځانګړتیاوی
1. لوړ فعالیت، چټک هضم؛
2. د ستوري ټیټ فعالیت، د "سکیلپیل" په څیر دقیق قطع کول یقیني کول؛
3. پرته له BSA او حیواناتو څخه وړیا؛
د میتیلیشن حساسیت
Dزه میتیلیشن:حساس نه؛
Dcm میتیلیشن:حساس نه؛
د CpG میتیلیشن:حساس نه؛
د ذخیره کولو شرایط
محصول باید ولیږدول شي ≤ 0℃؛په -25~- 15℃ حالت کې ذخیره کړئ.
د ذخیره کولو بفر
20mm Tris-HCl، 0.1mm EDTA، 500mm KCl، 1.0 mm dithiothreitol، 500 µg/ml Recombinant Albumin، 0. 1% Trition X- 100 او 50% ګیلیسرول (pH 7.0 @ 25°C).
د واحد تعریف
یو واحد د انزایم مقدار په توګه تعریف شوی چې د 1µg داخلي کنټرول DNA په 1 ساعت کې په 50°C کې د 50 μL ټول عکس العمل حجم کې هضم کولو لپاره اړین دی.
د کیفیت کنټرول
د پروټین پاکوالي ارزونه (SDS-PAGE):د BspQI پاکوالی ≥95٪ د SDS-PAGE تحلیل لخوا ټاکل شوی.
RNase:د BspQI 10U د 1.6μg MS2 RNA سره د 4 ساعتونو لپاره په 50℃ کې هیڅ تخریب نه رامینځته کوي لکه څنګه چې د agarose gel electrophoresis لخوا ټاکل کیږي.
د DNase غیر مشخص فعالیت:د BspQI 10U د 1μg λ DNA سره د 16 ساعتونو لپاره په 50℃ کې، د 1hour لپاره د 50℃ په پرتله، هیڅ اضافي DNA نه تولیدوي لکه څنګه چې د اګاروز جیل الیکٹروفورسیس لخوا ټاکل کیږي.
تړل او تکرار:د 10U BspQI سره د 1 μg λDNA هضم کولو وروسته، د DNA ټوټې د T4 DNA ligase سره په 16ºC کې تړل کیدی شي.او دا تړل شوي ټوټې کیدای شي د BspQI سره بیاځل شي.
ای کولی DNA: د E. coli 16s rDNA مشخص TaqMan qPCR کشف وښودله چې د E.coli جینوم پاتې شونه ≤ 0.1pg/ul.
د کوربه پروټین پاتې شوني:≤ 50 ppm
باکتریا Endotoxin: LAL-ټیسټ، د چینايي فارماکوپیا IV 2020 نسخه، جیل محدودیت ازموینې میتود، عمومي اصول (1143).د باکتریا انډوټوکسین مینځپانګه باید ≤10 EU/mg وي.
د غبرګون سیسټم او شرایط
| اجزا | حجم |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I بفر | 5 μL |
| dd H2O | تر 50 μL پورې |
د عکس العمل شرایط: 50 ℃, 1~ 16 ح.
د تودوخې غیر فعال کول: د 20 دقیقو لپاره 80 درجې.
وړاندیز شوی عکس العمل سیسټم او شرایط کولی شي نسبتا ښه انزایم هاضمي تاثیر چمتو کړي ، کوم چې یوازې د حوالې لپاره دی ، مهرباني وکړئ د توضیحاتو لپاره تجربوي پایلو ته مراجعه وکړئ.
د محصول غوښتنلیک
د Endonuclease هضم محدودیت، چټک کلونینګ.
یادښتونه
1. د انزایم حجم ≤ 1/10 د عکس العمل حجم.
2. د ستوري فعالیت ممکن واقع شي کله چې د ګلیسیرول غلظت له 5٪ څخه ډیر وي.
3. د تخریب فعالیت ممکن هغه وخت رامینځته شي کله چې سبسټریټ د وړاندیز شوي تناسب څخه ښکته وي.
